吡格列酮藥物延遲對大鼠跨區(qū)穿支皮瓣成活影響的實驗研究.pdf

1、目的:研究過氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPAR-γ）激動劑吡格列酮(Pioglitazone，Piog)藥物延遲對大鼠背部跨區(qū)穿支皮瓣成活及choke血管的影響，并探討其作用機制，為指導臨床上穿支皮瓣的擴大切取提供新的思路和方法。
　　方法:
　　1.實驗分組及動物模型制作:
　　80只雄性SD大鼠，體重250～300g，隨機分為實驗組和對照組，各40只，在大鼠背部右側建立保留一側旋髂深動脈穿支為蒂的三血管體穿支皮瓣

2、，包括兩個choke區(qū)域。實驗組術前吡格列酮10mg·kg-1·d-1溶于1.5ml生理鹽水連續(xù)5天灌胃，最后一次術前2小時灌胃，對照組同體積生理鹽水按上述方法灌胃。
　　2.皮瓣大體觀察及成活率的統(tǒng)計:
　　術后1-7天，肉眼觀察皮瓣成活狀況，包括皮瓣顏色、組織彈性、質(zhì)地，壞死面積等，并記錄。術后第7天麻醉下拍攝高質(zhì)量圖片，導入M2 Image AnalysisSystem軟件計算皮瓣成活面積百分比。
　　3.皮瓣明

3、膠-氧化鉛造影:
　　術后第7天取對照組、實驗組各5只，采用注射器將配置好的明膠-氧化鉛混合物注入頸動脈，經(jīng)X線對皮瓣進行血管造影。
　　4.實時熒光定量RT-PCR測PPAR-γmRNA表達:
　　術后第7天處死大鼠，實驗組、對照組各5只，取跨區(qū)穿支皮瓣chokeⅠ及chokeⅡ區(qū)中央?yún)^(qū)域皮瓣組織測PPAR-γ mRNA表達。
　　5.NO表達測定:
　　對照組和實驗組分別于術后即刻（術后1小時內(nèi)）、1d

4、、3d、5d、7d取chokeⅠ及Ⅱ區(qū)中央?yún)^(qū)域皮瓣組織。硝酸酶還原法測定組織一氧化氮(NO)含量，NO2-/NO3-含量代表NO水平。
　　6.ChokeⅡ區(qū)組織學檢測:
　　術后第7天實驗組、對照組各5只，取跨區(qū)穿支皮瓣chokeⅡ區(qū)中央?yún)^(qū)域皮瓣組織，進行HE染色，顯微鏡下測微血管密度(MVD)。
　　7.ChokeⅡ區(qū)免疫組化觀測VEGF表達:
　　術后第7天取chokeⅡ區(qū)中央組織免疫組織化學法檢測血管內(nèi)皮

5、生長因子(VEGF)表達情況。通過對圖片陽性表達的累積吸光度A值（IA）進行測量，作為評價血管內(nèi)皮生長因子表達的指標。
　　結果:
　　1.皮瓣大體觀察及成活率的統(tǒng)計:
　　術后第1天，兩組皮瓣均呈現(xiàn)不同程度的腫脹，皮瓣遠端呈暗紫色。術后第3天，皮瓣遠端呈現(xiàn)局部灶狀、小片狀壞死。術后7d兩組皮瓣遠端壞死部分均趨于融合，有不同面積痂殼出現(xiàn)，壞死區(qū)穩(wěn)定，界線清晰。兩組潛在區(qū)出現(xiàn)不同程度的壞死面積，實驗組壞死界限位于chok

6、eⅡ區(qū)以遠，對照組壞死界限接近于chokeⅡ區(qū)。根據(jù)公式:皮瓣成活率=皮瓣成活表面積/皮瓣總表面積×100％，計算各組皮瓣成活率。對照組和實驗組背部皮瓣壞死率分別為（76.07％±2.92％）和（87.73％±3.25％），實驗組皮瓣的成活面積顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　2.皮瓣明膠氧化鉛造影:
　　明膠-氧化鉛灌注造影顯示實驗組血管體血管形態(tài)較清，chokeⅠ及Ⅱ區(qū)真性吻合數(shù)較對照組明顯增多，實

7、驗組chokeⅠ、Ⅱ區(qū)真性吻合數(shù)分別是(5.40±1.14)、(3.20±0.84)，均顯著高于對照組的(3.00±0.71)、(0.80±0.84)，(P＜0.01)。
　　3.ChokeⅠ及Ⅱ區(qū)皮瓣組織PPAR-γ mRNA表達:
　　術后第7天，實驗組PPAR-γ mRNA表達較對照組有所提高。實驗組chokeⅠ及chokeⅡ區(qū)PPAR-γ mRNA表達量分別是對照組的1.32±0.14，1.53±0.23倍，與對照組

8、比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　4.ChokeⅠ及Ⅱ區(qū)皮瓣組織NO測定:
　　除術后即刻外，其余各時間點實驗組chokeⅠ、Ⅱ區(qū)NO含量均顯著高于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。兩組chokeⅠ區(qū)NO含量變化趨勢一致，術后即刻開始逐漸升高，至3d達峰值，之后逐漸下降，組內(nèi)各時間點間比較差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。實驗組chokeⅡ區(qū)NO含量變化趨勢與Ⅰ區(qū)一致，除術后即刻外，組內(nèi)各時間點間比較差

9、異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);對照組chokeⅡ區(qū)術后即刻NO含量即開始升高，1d時達峰值，之后逐漸下降，組內(nèi)各時間點間比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　5.ChokeⅡ區(qū)組織學檢測:
　　在chokeⅡ區(qū)，實驗組較對照組織輕度水腫，炎性細胞浸潤較輕，肉芽組織較少，皮膚附屬器存在，出現(xiàn)大量的新生血管。實驗組和對照組chokeⅡ區(qū)微血管計數(shù)分別為(33.16±7.73)個/mm2和(23.29±5.91)個/mm2

10、，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　6.ChokeⅡ區(qū)VEGF表達:
　　通過計算累積吸光度A值(IA)，得到實驗組和對照組chokeⅡ區(qū)陽性量分別為4368.80±458.23和2241.24±554.43，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　結論:PPAR-γ激動劑吡格列酮可以通過提高NO含量促進皮瓣choke血管擴張及提高VEGF表達促進皮瓣chokeⅡ區(qū)血管新生改善皮瓣遠端血供，從而提高了大鼠背部跨