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1、目的:研究過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPAR-γ)激動(dòng)劑吡格列酮(Pioglitazone,Piog)藥物延遲對(duì)大鼠背部跨區(qū)穿支皮瓣成活及choke血管的影響,并探討其作用機(jī)制,為指導(dǎo)臨床上穿支皮瓣的擴(kuò)大切取提供新的思路和方法。
方法:
1.實(shí)驗(yàn)分組及動(dòng)物模型制作:
80只雄性SD大鼠,體重250~300g,隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,各40只,在大鼠背部右側(cè)建立保留一側(cè)旋髂深動(dòng)脈穿支為蒂的三血管體穿支皮瓣
2、,包括兩個(gè)choke區(qū)域。實(shí)驗(yàn)組術(shù)前吡格列酮10mg·kg-1·d-1溶于1.5ml生理鹽水連續(xù)5天灌胃,最后一次術(shù)前2小時(shí)灌胃,對(duì)照組同體積生理鹽水按上述方法灌胃。
2.皮瓣大體觀察及成活率的統(tǒng)計(jì):
術(shù)后1-7天,肉眼觀察皮瓣成活狀況,包括皮瓣顏色、組織彈性、質(zhì)地,壞死面積等,并記錄。術(shù)后第7天麻醉下拍攝高質(zhì)量圖片,導(dǎo)入M2 Image AnalysisSystem軟件計(jì)算皮瓣成活面積百分比。
3.皮瓣明
3、膠-氧化鉛造影:
術(shù)后第7天取對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組各5只,采用注射器將配置好的明膠-氧化鉛混合物注入頸動(dòng)脈,經(jīng)X線對(duì)皮瓣進(jìn)行血管造影。
4.實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR測(cè)PPAR-γmRNA表達(dá):
術(shù)后第7天處死大鼠,實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組各5只,取跨區(qū)穿支皮瓣chokeⅠ及chokeⅡ區(qū)中央?yún)^(qū)域皮瓣組織測(cè)PPAR-γ mRNA表達(dá)。
5.NO表達(dá)測(cè)定:
對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組分別于術(shù)后即刻(術(shù)后1小時(shí)內(nèi))、1d
4、、3d、5d、7d取chokeⅠ及Ⅱ區(qū)中央?yún)^(qū)域皮瓣組織。硝酸酶還原法測(cè)定組織一氧化氮(NO)含量,NO2-/NO3-含量代表NO水平。
6.ChokeⅡ區(qū)組織學(xué)檢測(cè):
術(shù)后第7天實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組各5只,取跨區(qū)穿支皮瓣chokeⅡ區(qū)中央?yún)^(qū)域皮瓣組織,進(jìn)行HE染色,顯微鏡下測(cè)微血管密度(MVD)。
7.ChokeⅡ區(qū)免疫組化觀測(cè)VEGF表達(dá):
術(shù)后第7天取chokeⅡ區(qū)中央組織免疫組織化學(xué)法檢測(cè)血管內(nèi)皮
5、生長(zhǎng)因子(VEGF)表達(dá)情況。通過對(duì)圖片陽性表達(dá)的累積吸光度A值(IA)進(jìn)行測(cè)量,作為評(píng)價(jià)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)的指標(biāo)。
結(jié)果:
1.皮瓣大體觀察及成活率的統(tǒng)計(jì):
術(shù)后第1天,兩組皮瓣均呈現(xiàn)不同程度的腫脹,皮瓣遠(yuǎn)端呈暗紫色。術(shù)后第3天,皮瓣遠(yuǎn)端呈現(xiàn)局部灶狀、小片狀壞死。術(shù)后7d兩組皮瓣遠(yuǎn)端壞死部分均趨于融合,有不同面積痂殼出現(xiàn),壞死區(qū)穩(wěn)定,界線清晰。兩組潛在區(qū)出現(xiàn)不同程度的壞死面積,實(shí)驗(yàn)組壞死界限位于chok
6、eⅡ區(qū)以遠(yuǎn),對(duì)照組壞死界限接近于chokeⅡ區(qū)。根據(jù)公式:皮瓣成活率=皮瓣成活表面積/皮瓣總表面積×100%,計(jì)算各組皮瓣成活率。對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組背部皮瓣壞死率分別為(76.07%±2.92%)和(87.73%±3.25%),實(shí)驗(yàn)組皮瓣的成活面積顯著高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
2.皮瓣明膠氧化鉛造影:
明膠-氧化鉛灌注造影顯示實(shí)驗(yàn)組血管體血管形態(tài)較清,chokeⅠ及Ⅱ區(qū)真性吻合數(shù)較對(duì)照組明顯增多,實(shí)
7、驗(yàn)組chokeⅠ、Ⅱ區(qū)真性吻合數(shù)分別是(5.40±1.14)、(3.20±0.84),均顯著高于對(duì)照組的(3.00±0.71)、(0.80±0.84),(P<0.01)。
3.ChokeⅠ及Ⅱ區(qū)皮瓣組織PPAR-γ mRNA表達(dá):
術(shù)后第7天,實(shí)驗(yàn)組PPAR-γ mRNA表達(dá)較對(duì)照組有所提高。實(shí)驗(yàn)組chokeⅠ及chokeⅡ區(qū)PPAR-γ mRNA表達(dá)量分別是對(duì)照組的1.32±0.14,1.53±0.23倍,與對(duì)照組
8、比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
4.ChokeⅠ及Ⅱ區(qū)皮瓣組織NO測(cè)定:
除術(shù)后即刻外,其余各時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組chokeⅠ、Ⅱ區(qū)NO含量均顯著高于對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。兩組chokeⅠ區(qū)NO含量變化趨勢(shì)一致,術(shù)后即刻開始逐漸升高,至3d達(dá)峰值,之后逐漸下降,組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)組chokeⅡ區(qū)NO含量變化趨勢(shì)與Ⅰ區(qū)一致,除術(shù)后即刻外,組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)間比較差
9、異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);對(duì)照組chokeⅡ區(qū)術(shù)后即刻N(yùn)O含量即開始升高,1d時(shí)達(dá)峰值,之后逐漸下降,組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
5.ChokeⅡ區(qū)組織學(xué)檢測(cè):
在chokeⅡ區(qū),實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組織輕度水腫,炎性細(xì)胞浸潤(rùn)較輕,肉芽組織較少,皮膚附屬器存在,出現(xiàn)大量的新生血管。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組chokeⅡ區(qū)微血管計(jì)數(shù)分別為(33.16±7.73)個(gè)/mm2和(23.29±5.91)個(gè)/mm2
10、,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
6.ChokeⅡ區(qū)VEGF表達(dá):
通過計(jì)算累積吸光度A值(IA),得到實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組chokeⅡ區(qū)陽性量分別為4368.80±458.23和2241.24±554.43,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
結(jié)論:PPAR-γ激動(dòng)劑吡格列酮可以通過提高NO含量促進(jìn)皮瓣choke血管擴(kuò)張及提高VEGF表達(dá)促進(jìn)皮瓣chokeⅡ區(qū)血管新生改善皮瓣遠(yuǎn)端血供,從而提高了大鼠背部跨
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