人工設(shè)計(jì)抗菌肽KL-18及其體外殺菌和抗瘤作用的研究.pdf

1、目的:
　　根據(jù)抗菌肽(antimicrobial peptide,AMP)結(jié)構(gòu)和功能的關(guān)系,以新發(fā)現(xiàn)的抗菌肽LL-37為模板,從中選取其發(fā)揮抗菌作用必需的氨基酸序列,即其α-螺旋區(qū)域,對(duì)這段序列進(jìn)行分析和個(gè)別氨基酸的替換,得到一種人工設(shè)計(jì)的新型抗菌肽,檢測(cè)其抗菌效果,同時(shí)觀察這種新型抗菌肽對(duì)腫瘤細(xì)胞的影響以判斷其應(yīng)用于腫瘤免疫中的前景。
　　方法:
　?、旁赑ubMed上找到LL-37的全長(zhǎng)氨基酸序列,用蛋白質(zhì)分析軟

2、件分析其結(jié)構(gòu),找出其發(fā)揮抗菌作用必需的α-螺旋序列,對(duì)α-螺旋序列進(jìn)行疏水性以及螺旋形成等分析并替換部分氨基酸后送公司合成得到人工設(shè)計(jì)的新型抗菌肽;
　?、七x取大腸桿菌JM109,金黃色葡萄球菌臨床株,白色葡萄球菌臨床株,糞腸球菌耐氟喹諾酮類臨床株,糞腸球菌ATCC29212標(biāo)準(zhǔn)株做為我們的研究對(duì)象,采用微量稀釋法測(cè)定這種新型抗菌肽以及青霉素或者氨芐西林對(duì)他們的MIC值,并進(jìn)行比較;
　?、菍⑦@種新型抗菌肽分別與HepaG2

3、細(xì)胞以及THP-1細(xì)胞在96孔板內(nèi)共同孵育,收集不同濃度和不同時(shí)間段細(xì)胞培養(yǎng)液上清,檢測(cè)這兩株瘤細(xì)胞IL-8和TNF-α分泌量的變化,觀察這種新型抗菌肽誘導(dǎo)這兩株瘤細(xì)胞凋亡的作用。
　　結(jié)果:
　　⑴在對(duì) LL-37氨基酸序列進(jìn)行分析后找出了其中的α-螺旋序列,替換了其中的五個(gè)氨基酸,構(gòu)建了理論上疏水性和抗菌能力更好的新型抗菌肽 KL-18,并送公司合成,從而得到了這種新型的抗菌肽;
　?、七@種人工設(shè)計(jì)的新型抗菌肽具有

4、很好的殺菌活性,除了對(duì)金黃色葡萄球菌的殺菌能力與青霉素相同外,它對(duì)我們所研究的其余四株菌株的殺菌能力要顯著高于臨床上常用的抗生素,并且也要高于其來源肽LL-37;
　?、强咕腒L-18能夠抑制HepaG2表達(dá)IL-8,刺激HepaG2表達(dá)TNF-α。該肽能刺激THP-1細(xì)胞分泌IL-8和TNF-α。刺激HepaG2細(xì)胞分泌TNF-α具有時(shí)間依賴性。刺激THP-1細(xì)胞分泌IL-8和TNF-α具有劑量依賴性;
　?、瓤咕腒L

5、-18能夠誘導(dǎo)HepaG2細(xì)胞和THP-1細(xì)胞發(fā)生凋亡。
　　結(jié)論:
　　⑴成功設(shè)計(jì)并合成新型抗菌肽KL-18。
　?、茰y(cè)定了KL-18對(duì)大腸桿菌JM109等五株菌株的抗菌能力,抗菌肽KL-18對(duì)大腸桿菌JM109等五種菌株有較理想的抗菌效果,且對(duì)耐藥菌株效果較好。
　?、荎L-18能影響HepG2細(xì)胞以及THP-1細(xì)胞對(duì)細(xì)胞因子IL-8和TNF-α的表達(dá)。
　?、菿L-18能誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞以及THP-