荷瘤裸鼠CD-IRES-hSSTR2雙基因共表達受體介導核素顯像及治療的研究.pdf

1、腫瘤報告基因顯像、放射性核素導向放療及利用自殺基因進行腫瘤基因治療是目前腫瘤診斷與治療研究中的幾個重要的領(lǐng)域。它們均各有優(yōu)缺點。將三者結(jié)合，發(fā)揮三者協(xié)同殺傷腫瘤同時通過報告基因所表達的受體進行活體放射性受體顯像監(jiān)測腫瘤治療過程中的變化，在國內(nèi)尚未見文獻報道。本實驗采用人生長抑素受體2亞型為報告基因，RC-160為配體，大腸桿菌胞嘧啶脫氨酶為自殺基因、5-FC作為前體藥物，并用內(nèi)部核糖體進入位點連接生長抑素受體2亞型基因與大腸桿菌胞嘧啶脫

2、氨酶基因(CD-IRES-hSSTR2)，通過轉(zhuǎn)染技術(shù)建立了共表達人生長抑素受體2亞型及大腸桿菌胞嘧啶脫氨酶的非小細胞型肺腺癌細胞系：pCIS-A549，并將其植入BALB/C雄性裸鼠建立荷瘤裸鼠模型。利用該荷瘤裸鼠模型，通過99Tcm-RC160進行hSSTR2介導的報告基因放射性核素顯像，觀察其顯像特征；通過131I-RC160進行荷瘤裸鼠腫瘤的實驗性治療并觀察其治療效果。為后續(xù)研究提供實驗基礎(chǔ)與依據(jù)。 材料和方法:利用本實

3、驗組之前研究中已經(jīng)得到的CD-IRES2-SSTR(PCIS)質(zhì)粒，將其轉(zhuǎn)染入非小細胞型肺癌細胞系A(chǔ)549細胞內(nèi)并通過Westernblot蛋白分析及流式細胞儀技術(shù)篩選陽性克隆；篩選出的陽性克隆和對照組克隆分別植入BALB/C雄性裸鼠，建立荷瘤裸鼠模型；用99Tcm標記RC160(99Tcm-RC160)進行hsstr2介導荷瘤裸鼠的報告基因顯像；用131I標記RC160(131I-RC160)并通過靜脈給藥比較單用131I-RC-16

4、0、131I-RC-160協(xié)同5-FC及單用5-FC的腫瘤抑制效應(yīng)，并取腫瘤進行免疫熒光觀察。 結(jié)果: 1.成功建立了pCIS(實驗組)、pEGFP(對照組)轉(zhuǎn)染細胞系，并經(jīng)Westernblot蛋白分析及流式細胞儀技術(shù)篩選出pCIS-A549陽性克隆2株及1株pEGFP-A549對照組克隆。 2.實驗組及對照組克隆細胞成功植入6周齡BALB/C雄性裸鼠，成功建立了荷瘤裸鼠模型。 3.用酒石酸亞錫作還原劑

5、，用99Tcm直接標記RC-160成功，標記率達到91.52％，比活度為到38.4×1012Bq/mmol，無需純化，室溫放置6h后，放化純?nèi)裕?5％。 4.荷瘤裸鼠受體顯像每只裸鼠經(jīng)尾靜脈注射0.1ml(1.85-3.7MBq)的99Tcm-RC-160，注射量0.1ml，在注射后1h，可見右后肢的移植陽性腫瘤呈放射性高度濃集影，但對比度低；24h移植瘤持續(xù)顯影，對比度高。陰性對照腫瘤始終未顯影。 5通過NBS高效碘標

6、法用131I標記RC160得到131I-RC160，標記率達到90％，比活度為1.92×1012Bq/mmoL。 6荷瘤裸鼠實驗性治療的抑瘤效果：實驗組分3組，分別靜脈給藥：Ⅰ組131I-RC-160，Ⅱ組131I-RC-160協(xié)同5-FC；Ⅲ組5-FC，Ⅳ組pCIS對照組及Ⅴ組pFGFP空白對照組各一組。4周后，各組腫瘤大小分別為：1.258±0.276cm3(Ⅰ組)，0.918±0.098cm3(Ⅱ組)，1.314±0.21

7、7cm3(Ⅲ組)，1.814±0.187cm3(Ⅳ組)及1.927±0.246cm3(Ⅴ組)。第Ⅱ?qū)嶒灲M腫瘤體積明顯小于其他2個實驗組(Ⅰ，Ⅲ)和2個對照組(Ⅳ，Ⅴ)，經(jīng)T檢驗統(tǒng)計分析與其他各組有明顯差異(P＜0.05). 7免疫熒光分析：3個實驗組切片可見腫瘤細胞壞死。第Ⅱ?qū)嶒灲M腫瘤細胞壞死明顯；壞死區(qū)域內(nèi)SSTR2受體熒光分布稀疏，腫瘤存活區(qū)域內(nèi)熒光分布與Ⅳ組對照組相近。 結(jié)論1：CD-IRES-hSSTR2共表達載

8、體轉(zhuǎn)染的非小細胞肺癌細胞系可用于制作腫瘤的放射受體顯像和放射受體治療的動物模型； 2：99Tcm-RC-160可用于荷pCI-A549腫瘤裸鼠的報告基因顯像，陽性腫瘤于注射后1h即可顯像，24小時腫瘤顯像清晰并且對比度高； 3：131I-RC-160協(xié)同5-FC治療荷pCIS腫瘤的抑瘤效果優(yōu)于單獨應(yīng)用131I-RC-160或5-FC。 4：利用CD-IRES-hSSTR2，協(xié)同“自殺基因/前體藥物”及放射性核素標