hSSTR2基因轉(zhuǎn)染肺癌細(xì)胞的腫瘤核素顯像與殺傷研究.pdf

1、目的:將人生長(zhǎng)抑素受體2亞型（hSSTR2）基因轉(zhuǎn)染至該受體表達(dá)陰性的腫瘤細(xì)胞，研究125I－伐普肽(RC-160)與其結(jié)合的規(guī)律，以及131I－RC-160對(duì)轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞的殺傷作用，并進(jìn)行該受體介導(dǎo)的腫瘤顯像研究。
　　方法:1.應(yīng)用反轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）方法獲得hSSTR2基因并構(gòu)建真核表達(dá)載體；2.將hSSTR2基因轉(zhuǎn)染至hSSTR2表達(dá)陰性的肺腺癌A549細(xì)胞系，RT-PCR及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)受體的表達(dá)，并篩選hSST

2、R2的高表達(dá)的細(xì)胞株；3.采用放射性配基結(jié)合分析法，以125I－RC-160為放射性配基，對(duì)高表達(dá)hSSTR2基因的細(xì)胞株進(jìn)行該受體體外結(jié)合特性研究；4.采用四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）法測(cè)不同濃度131I-RC-160、Na131I、RC-160對(duì)轉(zhuǎn)染細(xì)胞作用24、48、72和96h的殺傷效應(yīng)；5.建立裸鼠移植瘤模型，以99mTc-RC-160為受體顯像劑，探索該受體介導(dǎo)的腫瘤顯像方法。
　　結(jié)果;獲得經(jīng)測(cè)序完全正確的hSSTR2基

3、因，RT-PCR及流式細(xì)胞術(shù)鑒定選取高表達(dá)hSSTR2基因的細(xì)胞株，體外結(jié)合實(shí)驗(yàn)測(cè)得平衡解離常數(shù)KD=5.65×10-10mol/L，最大結(jié)合容量Bmax=2.01×104結(jié)合位點(diǎn)／細(xì)胞，半數(shù)抑制濃度IC50=1.88×10-9mol/L；131I－RC-160對(duì)A549-hSSTR2細(xì)胞的殺傷作用較其對(duì)A549-pcDNA3細(xì)胞殺傷作用明顯增強(qiáng)，并呈一定的劑量-效應(yīng)和時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系，在96h時(shí)，3.7MBq/ml的131I－RC-16

4、0對(duì)A549-hSSTR2的抑制率達(dá)78.8±5.9％。裸鼠腫瘤模型顯像顯示靜脈注射顯像劑99mTc－RC-160后0.5－1h腫瘤顯影明顯，之后腫瘤顯影漸消退，于注射后24h腫瘤部位仍見(jiàn)顯影。
　　結(jié)論:將hSSTR2轉(zhuǎn)染至該受體表達(dá)陰性的腫瘤細(xì)胞并進(jìn)行受體介導(dǎo)的腫瘤顯像是可行的，適宜顯像時(shí)間為注射99mTc-RC-160后0.5－1h；131I－RC-160對(duì)A549-hSSTR2細(xì)胞的殺傷作用較131I或RC-160對(duì)A54