抗甲狀腺髓樣癌人源單鏈抗體的篩選及在荷瘤裸鼠模型中的放射免疫顯像研究.pdf

1、目的：從大容量甲狀腺髓樣癌（medullary thyroid carcinoma，MTC）人源單鏈抗體（single chain variable fragments，scFv）庫中篩選出特異性抗MTC單鏈抗體，131I標記，研究荷瘤裸鼠131I-scFv放射免疫顯像(radioimmunoimaging, RII)特點。
　　方法：對抗甲狀腺髓樣癌細胞單鏈抗體庫展開了5輪循環(huán)富集，篩選出的陽性克隆感染E. coli HB215

2、1；誘導(dǎo)該抗體可溶性表達并純化抗體；SDS-PAGE和Western blot檢測抗體表達和相對分子質(zhì)量；ELISA檢測可溶性scFv的特異性和免疫活性；四甲基偶氮唑鹽比色分析法分別測定設(shè)置每組的吸光度（OD值），計算細胞抑制率。氯胺T法對可溶性scFv行131I標記并進行純化，三氯醋酸沉淀法測定標記率，標記抗體的放射化學純度、室溫及血清穩(wěn)定性由紙層析法測定。建荷MTC細胞（TT細胞）裸鼠，注射131I-scFv，分析131I-scFv

3、在裸鼠體內(nèi)分布情況，并于注射藥物12、24、48、72 h行SPECT正位靜態(tài)顯像，當腫瘤組織顯像符合要求時行SPECT/CT融合圖像。
　　結(jié)果：經(jīng)5輪篩選，特異抗體明顯富集。SDS-PAGE、Western blot結(jié)果顯示MTC特異性抗體分子量為28 kD左右。ELISA結(jié)果顯示，TT細胞（人甲狀腺髓樣癌細胞）組的OD值（0.41±0.12）較SW480細胞（人結(jié)腸癌細胞）組（0.20±0.03）、TEC細胞（人甲狀腺上皮細

4、胞）組（0.13±0.01）、PBS空白對照組（0.07±0.01）明顯增加（P=0.000）。MTT法結(jié)果顯示，TT細胞組和SW480細胞組在scFv濃度為0.1、1、10μmol/L時，兩組細胞株間抑制率有統(tǒng)計學意義，在scFv濃度為10μmol/L時，對TT細胞有最高的抑制率（0.59±0.15）％?？贵w標記率為(78.60±0.08)%，放化純度為(87.10±0.78)%，各個時間點的放化純度均在90%以上。荷瘤裸鼠體內(nèi)研究結(jié)