抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體的靶抗原研究.pdf

1、內(nèi)皮細(xì)胞在系統(tǒng)性血管炎的發(fā)病機(jī)制中起著重要作用?？箖?nèi)皮細(xì)胞抗體(AECA)可識別內(nèi)皮細(xì)胞表面的多種抗原成分，引起免疫反應(yīng)是導(dǎo)致內(nèi)皮損傷可能的機(jī)制之一。本研究的前期工作中，應(yīng)用免疫印跡技術(shù)研究了AECA在系統(tǒng)性血管炎和其他多中自身免疫病患者血清中的陽性率。在不同系統(tǒng)性血管炎和SLE患者血清中均存在與內(nèi)皮細(xì)胞47kDa分子量抗原相結(jié)合的抗體。經(jīng)蛋白質(zhì)組學(xué)方法分離鑒定其成分為α烯醇化酶。目的：在前期工作的基礎(chǔ)上，對蛋白質(zhì)組學(xué)分離和鑒定的AEC

2、A相關(guān)抗原進(jìn)行基因重組和表達(dá)，檢測其相關(guān)抗體在血管炎和其他自身免疫性疾病患者血清中的陽性率。 方法：以人胎盤λZAPExpresscDNA文庫為模板PCR擴(kuò)增人enol基因CDS片段，與表達(dá)載體重組后，在大腸桿菌中表達(dá)和純化重組的人α烯醇化酶。用質(zhì)譜鑒定后的重組蛋白作為抗原，用Western雜交和ELISA法分別檢測正常人和不同結(jié)締組織患者血清中抗人α烯醇化酶抗體水平。 結(jié)果： 1.克隆了人α烯醇化酶基因cDNA

3、片段，將重組的人α烯醇化酶在大腸桿菌中進(jìn)行原核表達(dá)和純化。 2.質(zhì)譜鑒定重組蛋白為帶有6個(gè)組氨酸的重組人α烯醇化酶。 3.用重組蛋白作為抗原，Western雜交檢測正常人和不同結(jié)締組織病中抗人α烯醇化酶抗體。 4.ELISA檢測抗α烯醇化酶抗體在正常人及各疾病組患者血清中的陽性率分別為系統(tǒng)性血管炎51.6％，SLE41.2％，SS16.7％，RA46.7％，正常人1.7％，與正常人相比，系統(tǒng)性血管炎及其他各疾病組

4、患者血清中該抗體水平明顯增高，并具有顯著性差異。與WB法檢測相比，ELISA檢測所得抗α烯醇化酶抗體在各組患者中血清的陽性率有所降低。 結(jié)論：本研究是在對大樣本多種血管炎和SLE、SS、RA等多種自身免疫性疾病患者血清中AECA檢測后的后續(xù)工作，進(jìn)一步證實(shí)了α烯醇化酶是AECA識別的自身抗原之一。通過對多種自身免疫性疾病患者血清中抗α烯醇化酶抗體水平的檢測發(fā)現(xiàn)，PM/DM患者和正常人血清中不存在此抗體，而系統(tǒng)性血管炎和SLE、S