生物轉(zhuǎn)化法生產(chǎn)2-0-葡萄糖基抗壞血酸的研究.pdf_第1頁(yè)
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1、L-抗壞血酸(簡(jiǎn)稱VC)在體內(nèi)發(fā)揮著重要的生理作用,但其還原性強(qiáng),極不穩(wěn)定,這使得它在應(yīng)用上受到了很大的限制.VC的衍生物則大大提高了它的穩(wěn)定性,而不影響它的生理功能.該課題就其衍生物之一2-O-葡萄糖基抗壞血酸在糖基轉(zhuǎn)移酶的作用下的生物合成及產(chǎn)物分離純化作了較系統(tǒng)的研究.該課題以嗜熱脂肪芽孢桿菌(Bacillus.stearothermophilis)為出發(fā)菌株,通過單因素實(shí)驗(yàn),初步確立了其產(chǎn)生糖基轉(zhuǎn)移酶的培養(yǎng)基碳源為1％葡萄糖,氮源

2、為0.5％蛋白胨,培養(yǎng)基裝量為250ml三角瓶中裝30ml,接種量為4％,培養(yǎng)基初始pH為8.0,培養(yǎng)溫度為55℃.采用正交實(shí)驗(yàn),得出生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)的最佳條件為:以CMC-Na為葡萄糖基的供體,濃度為0.04mol/L VC作為受體,酶量是25mL,pH值4.0,溫度60℃下反應(yīng)16hr.采用紫外線誘變育種,篩選到一株酶轉(zhuǎn)化能力提高了149.28％的菌株Z3104,使AA-2G含量達(dá)到了274.78mg/L.將Plackett-Burma

3、n法與響應(yīng)面分析法相結(jié)合,利用origin軟件優(yōu)化菌種產(chǎn)酶條件,得最佳條件為:葡萄糖2％,蛋白胨0.6％,MgSO<,4>·7H<,2>O 0.01％,KH<,2>PO<,4>0.0625％,初始pH為7.15,48℃,200r/min培養(yǎng)48小時(shí),在此條件下所產(chǎn)的酶轉(zhuǎn)化得產(chǎn)物含量為375.24mg/L,比優(yōu)化前提高了41.16％.最后,對(duì)B.stearothermophilis產(chǎn)酶發(fā)酵過程進(jìn)行了發(fā)酵罐放大研究,使菌體產(chǎn)酶量和活力提高,

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