牛蒡子葡萄糖苷酶生物轉(zhuǎn)化及其性質(zhì)研究.pdf

1、牛蒡子中主要物質(zhì)為牛蒡苷，而作為主要藥理活性物質(zhì)的牛蒡苷元含量非常低，因此將牛蒡苷轉(zhuǎn)化為牛蒡苷元具有重要的應(yīng)用價(jià)值。本研究利用源于牛蒡子的葡萄糖苷酶將牛蒡苷生物轉(zhuǎn)化為牛蒡苷元，并對(duì)牛蒡子葡萄糖苷酶的分離純化、酶學(xué)性質(zhì)及其對(duì)槐角苷的生物轉(zhuǎn)化進(jìn)行研究，主要研究結(jié)果如下：
　　利用牛蒡子所含的葡萄糖苷酶對(duì)牛蒡苷進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化。首先建立牛蒡苷元HPLC測(cè)定方法：流動(dòng)相甲醇-水（1：1.1）；流速1.0mL/min；測(cè)定波長(zhǎng)280nm；進(jìn)樣量

2、10μL，在該測(cè)定方法下，牛蒡苷元測(cè)定的穩(wěn)定性、精密度和回收率分別為0.91％、0.52％和101.2％；其次，獲得了牛蒡苷元最優(yōu)提取條件：乙醇濃度50％、料液比1：10、提取時(shí)間16min，在該條件下，牛蒡苷元提取率達(dá)到9mg/g，較優(yōu)化前提高28.59％；最后確定牛蒡子葡萄糖苷酶生物轉(zhuǎn)化牛蒡苷的最優(yōu)時(shí)間為3min，轉(zhuǎn)化率達(dá)到90％以上，牛蒡苷元含量從7.10mg/g上升到41.53mg/g，進(jìn)一步通過(guò)萃取、硅膠柱層析、乙醇結(jié)晶獲得牛

3、蒡苷元晶體，其純度達(dá)到98.50％，并對(duì)分離純化的牛蒡苷元進(jìn)行了UV、IR、MS、NMR結(jié)構(gòu)鑒定，證實(shí)分離純化產(chǎn)物為牛蒡苷元。
　　利用離子交換層析、疏水作用層析等方法從牛蒡子中分離純化得到電泳純的牛蒡子葡萄糖苷酶，收率為2.61％，純化倍數(shù)達(dá)到132倍，比酶活達(dá)到3.58U/mg。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，純化牛蒡子葡萄糖苷酶的最適溫度和pH值分別為55℃和6.0；Cu2+、Cd2+、Al3+和SDS對(duì)該酶酶活強(qiáng)烈抑制。
　　最后，

4、研究了純化牛蒡子葡萄糖苷酶對(duì)其它糖苷類(lèi)物質(zhì)的轉(zhuǎn)化能力。發(fā)現(xiàn)該糖苷酶可將槐角提取液中的染料木素鼠李糖基葡糖二苷水解成槐角苷，進(jìn)而轉(zhuǎn)化為染料木素。轉(zhuǎn)化32 min后，槐角提取液中染料木素的生成量達(dá)到527.7 mg/L，是商業(yè)纖維素酶轉(zhuǎn)化效果的2倍，初步說(shuō)明牛蒡子葡萄糖苷酶是一種廣譜性的高效糖苷酶。
　　通過(guò)上述研究，本論文成功建立了一種利用牛蒡子葡萄糖苷酶制備高純度牛蒡苷元的方法，同時(shí)也為牛蒡子葡萄糖苷酶在其它中藥生物轉(zhuǎn)化中奠定了應(yīng)