豬腸道產(chǎn)細菌素菌株的篩選和鑒定.pdf

1、本研究通過對健康成年豬腸道內(nèi)生菌群的分離，利用點種法篩選出對臨床分離的致病性大腸桿菌有明顯抑制作用的腸道活性菌株作為研究對象，通過排除酸、過氧化氫試驗、酶解試驗來初步確定活性菌株所產(chǎn)抑菌活性產(chǎn)物為多肽或蛋白類物質(zhì)。通過對活性菌株盲腸2號菌菌落形態(tài)、代謝試驗及16S rDNA的檢測，鑒定其為枯草芽孢桿菌。通過對活性菌株盲腸2號菌生產(chǎn)活性產(chǎn)物時的接種量、初始pH、培養(yǎng)溫度、發(fā)酵時間、培養(yǎng)基組成的研究，確定了該菌株生產(chǎn)活性物質(zhì)的最佳條件，為今

2、后進一步開發(fā)和利用該活性菌株奠定了基礎(chǔ)。主要內(nèi)容包括以下三個部分：
　　1.豬腸道內(nèi)生菌群活性菌株的分離。從健康成年豬腸道不同區(qū)段（十二指腸、空腸、回腸、盲腸、結(jié)腸、直腸）的菌群中進行腸道內(nèi)生菌株的分離和培養(yǎng)，分離得到形態(tài)特征盡可能不同的菌落共計2317株，以臨床分離的致病性大腸桿菌（Escherichia coli）作為指示菌，點種法對峙培養(yǎng)，將對指示菌具有明顯抑菌作用的腸道內(nèi)生菌株進行分離純化，作為候選活性菌株。利用牛津杯瓊脂

3、擴散法對這些候選活性菌株的發(fā)酵上清液的抑菌活性進行檢測，排除產(chǎn)酸、過氧化氫的可能后，再進行胰蛋白酶、木瓜蛋白酶的酶解處理，將酶解后發(fā)酵上清抑菌活性明顯降低或完全喪失的菌株推定為產(chǎn)蛋白質(zhì)類抑菌物質(zhì)的活性菌株，留作進行后續(xù)研究。
　　2.活性菌株的鑒定。以活性菌株盲腸2號菌的菌落特征、革蘭氏染色，以及各種代謝反應(yīng)試驗結(jié)果為依據(jù)，初步確定盲腸2號菌株為芽孢桿菌（Bacillus）。進一步通過對盲腸2號菌的16S rDNA測序結(jié)果：盲腸2