產(chǎn)共軛亞油酸瘤胃細(xì)菌的篩選與鑒定.pdf

1、本研究通過(guò)亨蓋特厭氧操作方法從反芻動(dòng)物牛、羊的瘤胃內(nèi)容物中分離瘤胃細(xì)菌，采用紫外光譜法和氣相色譜結(jié)合法，從分離出的瘤胃細(xì)菌中篩選產(chǎn)cis9，trans11-CLA和trans10，cis12-CLA這兩種具有生理活性共軛亞油酸異構(gòu)體的菌株；并通過(guò)形態(tài)特征觀察、16SrDNA序列分析、脂肪酸組成分析以及生理生化特征測(cè)定，對(duì)篩選出的菌株進(jìn)行分類鑒定。研究結(jié)果如下：
　　 (1).從中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)基地和內(nèi)蒙古鄂爾多斯

2、采集9個(gè)瘤胃內(nèi)容物樣品，通過(guò)亨蓋特厭氧操作方法分離瘤胃細(xì)菌，經(jīng)滾管培養(yǎng)得到58株瘤胃細(xì)菌純培養(yǎng)。這58株瘤胃細(xì)菌的菌落顏色以白色為主，少數(shù)為黃色；菌落大小均較小，菌落直徑為1～5mm；菌落形狀以光滑的圓形為主，少數(shù)為不規(guī)則形狀。
　　 (2).采用紫外光譜法初篩，從分離到的58株瘤胃細(xì)菌中篩選到8株具有產(chǎn)共軛亞油酸的能力的菌株。其中有4株在波長(zhǎng)為232nm的紫外區(qū)有吸收峰，3株在233nm處有吸收峰，另外1株的吸收峰在234nm

3、處。8個(gè)菌株吸收峰的OD值為0.4～0.9，最高的是菌株7512，吸收峰的OD值為0.8086。
　　 (3).運(yùn)用氣相色譜法復(fù)篩，從紫外分光光度法篩選出的8株瘤胃細(xì)菌中篩選產(chǎn)cis9，trans11-CLA和trans10，cis12-CLA這兩種具有生理活性共軛亞油酸異構(gòu)體的菌株。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，8株瘤胃細(xì)菌有具有產(chǎn)cis9，trans11-CLA和trans10，cis12-CLA的能力，產(chǎn)量最高的是菌株111，cis9，t

4、rans11-CLA和trans10，cis12-CLA產(chǎn)量分別為141.7μg/mL和127.5μg/mL。
　　 (4).在MRS固體培養(yǎng)基上觀察了8株產(chǎn)共軛亞油酸瘤胃細(xì)菌的菌落形態(tài)特征，并進(jìn)行細(xì)胞革蘭氏染色，電子顯微鏡掃描觀察細(xì)胞形態(tài)特征。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，8株產(chǎn)共軛亞油酸瘤胃細(xì)菌都為革蘭氏陽(yáng)性，菌落顏色均為白色；菌落形狀多為圓形，少數(shù)為不規(guī)則形狀；菌落邊緣以整齊光滑居多，少數(shù)呈波浪狀；菌落直徑為1～5mm；8個(gè)菌株的細(xì)胞形態(tài)