2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:
  1.探索超聲微泡靶向破壞聯(lián)合轉(zhuǎn)染試劑Entranster能否提高aggrecanase-1基因轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率;2.制備兔類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型,并對(duì)其進(jìn)行評(píng)估;3.超聲微泡靶向破壞聯(lián)合轉(zhuǎn)染試劑Entranster in vivo介導(dǎo)aggrecanase-1 shRNA,COX-2 shRNA,hIGF體內(nèi)轉(zhuǎn)染對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎膝關(guān)節(jié)的影響。
  方法:
  應(yīng)用全骨髓培養(yǎng)法培養(yǎng)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者骨髓

2、間充質(zhì)干細(xì)胞。將第3代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞接種于24孔板中,共分為4組:1.超聲靶向微泡破壞組(UTMD);2.轉(zhuǎn)染試劑Entranster組(ENTR);3.超聲微泡靶向破壞+轉(zhuǎn)染試劑Entranster組(UTMD+ENTR);4.對(duì)照組。轉(zhuǎn)染后第2天、第4天、第6天,在倒置熒光顯微鏡下,觀察aggrecanase shRNA轉(zhuǎn)染情況;應(yīng)用熒光定量PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染后aggrecanase mRNA水平的變化。家兔類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型制備:應(yīng)用

3、牛Ⅱ型膠原溶液與完全弗氏佐劑混合成乳劑,取1 ml共分10點(diǎn)注射于家兔肩胛骨區(qū)域。致敏后,膝關(guān)節(jié)注入1ml(5g/L)膠原蛋白溶液,觀察足掌關(guān)節(jié)腫脹程度,對(duì)關(guān)節(jié)炎進(jìn)行評(píng)分以及病理學(xué)組織檢查。體內(nèi)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn):將造模成功的兔類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型分為3組:空白對(duì)照組:僅在家兔右膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射等量的PBS;單純質(zhì)粒組:取200ul Aggrecanase-2 shRNA(10ug)、COX-2 shRNA(10ug)、hIGF(10ug)質(zhì)粒以及10

4、0ul PBS注入家兔右膝關(guān)節(jié)腔內(nèi);質(zhì)粒+Entranster-in vivo+超聲微泡組:各取200ul Aggrecanase-2 shRNA(10ug)、COX-2 shRNA(10ug)、IGF(10ug)、Entranster-in vivo轉(zhuǎn)染試劑以及100ul六氟化硫微泡液體注入家兔右膝關(guān)節(jié)腔內(nèi),在4.9MHz頻率下,超聲探頭掃右膝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)5分鐘。大體觀察比較各組間關(guān)節(jié)病變及改善情況;病理組織檢查各組間炎細(xì)胞有無(wú)減少;體內(nèi)

5、轉(zhuǎn)染4天后,切取各組右膝關(guān)節(jié)滑膜組織,用冰凍切片機(jī)切片,在熒光顯微鏡下觀察各組間基因轉(zhuǎn)染情況;RT-PCR檢測(cè)各組滑膜組織COX-2、aggrecanse表達(dá)水平;ELISA法檢測(cè)各組右膝關(guān)節(jié)灌洗液hIGF-I含量。
  結(jié)果:
  在倒置熒光顯微鏡下觀察UTMD+ENTR組綠色熒光最強(qiáng);UTMD組和ENTR組次之,對(duì)照組最暗。轉(zhuǎn)染后各組間比較aggrecanase mRNA表達(dá)水平;UTMD+ENTR組下降最明顯。UTMD

6、聯(lián)合轉(zhuǎn)染試劑Entranster的轉(zhuǎn)染效率高于單純超聲輻照和Entranster轉(zhuǎn)染(P<0.01);牛Ⅱ型膠原與完全弗氏佐劑混合乳劑皮下注射并誘導(dǎo)后,膝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)腫脹,關(guān)節(jié)直徑增加,皮膚溫度升高,1周后,病理切片鏡下滑膜組織內(nèi)大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn);體內(nèi)實(shí)驗(yàn):?jiǎn)渭冑|(zhì)粒組,關(guān)節(jié)腔注射后,滑膜組織制成冰凍切片后,熒光顯微鏡下觀察熒光微弱,質(zhì)粒+Entranster-in vivo+超聲微泡組,熒光顯微鏡下可見大量熒光彌漫于滑膜組織。Entrans

7、ter-in vivo+超聲微泡組的COX-2mRNA、aggrecanase mRNA表達(dá)水平明顯低于空包對(duì)照和單純質(zhì)粒組;各組間應(yīng)用ELISA法檢測(cè)膝關(guān)節(jié)灌洗液hIGF-I含量比較后Entranster-in vivo+超聲微泡組水平最高。關(guān)節(jié)腔注射后兩周滑膜組織HE染色切片觀察,Entranster-in vivo+超聲微泡組炎細(xì)胞數(shù)量較其他兩組減少,但大體外觀見各組的關(guān)節(jié)修復(fù)沒(méi)有明顯差別。
  結(jié)論:
  UTMD聯(lián)

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