人纖維介素在惡性腫瘤中的表達(dá)研究及意義探討.pdf

1、目的:新近發(fā)現(xiàn)的纖維介素蛋白[Fibrinogen-likeprotein2(fgl2)/fibroleukin]屬纖維蛋白原相關(guān)蛋白超家族，又稱fgl2凝血酶原酶，具有絲氨酸蛋白酶活性。fgl2凝血酶原酶基因在人類位于7q11,23染色體，其產(chǎn)物的生物學(xué)活性類似于活化的凝血因子(Xa)，可直接催化凝血酶原轉(zhuǎn)變成有活性的凝血酶，從而快速啟動(dòng)凝血反應(yīng)。國(guó)內(nèi)外研究已發(fā)現(xiàn)，hfgl2凝血酶原酶在一些以微循環(huán)障礙為病理生理特征的疾病模型，如暴發(fā)

2、性病毒性肝炎、自發(fā)性流產(chǎn)、同種及異種移植排斥反應(yīng)中表達(dá)增高，其所介導(dǎo)的免疫凝血、纖維素沉積和微血栓形成與上述疾病的病理?yè)p害密切相關(guān)，用特異性抗體干預(yù)后可顯著提高實(shí)驗(yàn)動(dòng)物存活率。 凝血酶除了在止凝血方面的基本功能外，也是一種強(qiáng)有力的絲裂原，可影響細(xì)胞功能。由于凝血酶能夠顯著增強(qiáng)腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的潛力，因此對(duì)腫瘤生物學(xué)行為有重要影響。組織因子(TissueFactor，TF)與凝血酶是通過凝血依賴及凝血非依賴途徑來促進(jìn)腫瘤血管新生和轉(zhuǎn)

3、移的。人纖維介素(humanfibrinogen-likeprotein2/fibroleukin，hfgl2)作為一種新發(fā)現(xiàn)的促凝物，極有可能也參與了腫瘤微環(huán)境中高凝狀態(tài)的形成。本研究旨在檢測(cè)hfgl2在惡性腫瘤中的表達(dá)，為進(jìn)一步研究腫瘤的局部凝血異常和更有成效的腫瘤抗凝治療提供新的視角。 方法:采用免疫組化方法對(duì)六種常見惡性腫瘤(共計(jì)133例，含結(jié)腸癌、乳腺癌、肺癌、食管癌、宮頸癌、胃癌)的病理組織切片中hfgl2蛋白的表達(dá)

4、進(jìn)行檢測(cè)；用雙染法檢測(cè)了hfgl2和纖維蛋白的表達(dá)及位置關(guān)系；采用連續(xù)切片及相應(yīng)的單抗對(duì)陽(yáng)性細(xì)胞進(jìn)行分型；用RT-PCR對(duì)腫瘤組織和幾種腫瘤細(xì)胞系中hfgl2mRNA的表達(dá)進(jìn)行了半定量分析，用原位雜交對(duì)腫瘤組織中hfgl2mRNA的表達(dá)進(jìn)行了定位分析。 在體外用細(xì)胞因子IFN-γ和IL-2刺激人單核細(xì)胞(THP1)和內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)，采用Western-Blotting和實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)hfgl2的誘導(dǎo)性表達(dá)，并對(duì)誘導(dǎo)前

5、后細(xì)胞的促凝功能做了檢測(cè)。 采用免疫組化檢測(cè)了25例急、慢性白血病患者的外周全血涂片和外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)涂片中的hfgl2的表達(dá)；用dot-ElISA方法對(duì)急、慢性白血病患者的PBMC中hfgl2蛋白的表達(dá)也進(jìn)行了檢測(cè)。 結(jié)果:通過免疫組化在133例惡性腫瘤中的127例檢測(cè)到hfgl2蛋白的表達(dá)，囊括了其中所有發(fā)生轉(zhuǎn)移的病例(97例)。雙染顯示hfgl2陽(yáng)性區(qū)域附近有明顯的纖維蛋白沉積。連續(xù)切片顯示除腫瘤細(xì)胞外

6、，間質(zhì)中的巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞和部分血管內(nèi)皮細(xì)胞也有hfgl2表達(dá)。原位雜交顯示在相應(yīng)部位檢測(cè)到hfgl2mRNA。 IL-2、IFN-γ能夠在體外明顯上調(diào)THP-1和HUVEC細(xì)胞中hfgl2的表達(dá)，定量PCR顯示其mRNA的拷貝數(shù)在誘導(dǎo)后較靜息狀態(tài)下升高102倍，刺激后的細(xì)胞也表現(xiàn)出明顯升高的促凝活性(PCA)。 急性白血病患者各亞型的PBMC中均有hfgl2蛋白的表達(dá)，其中M3和M5型尤為突出，慢