Necrostatin-1對(duì)創(chuàng)傷失血性休克所致肺損傷保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的:
　　本實(shí)驗(yàn)以SD大鼠為研究對(duì)象建立非致命性創(chuàng)傷失血性休克模型，觀察各組大鼠肺組織病理變化、支氣管肺泡灌洗液中蛋白質(zhì)含量、受體交互作用蛋白1(RIP1)及RIP3含量、程序性壞死細(xì)胞比例，并觀察Nec-1對(duì)以上指標(biāo)的影響，以觀察Nec-1對(duì)創(chuàng)傷失血性休克所致肺損傷是否有保護(hù)作用，并探討其可能機(jī)制，為MODS發(fā)生發(fā)展機(jī)制的完善提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　隨機(jī)分配96只SD雄性大鼠，創(chuàng)傷組、假創(chuàng)傷組、干預(yù)組、溶媒

2、對(duì)照組各3個(gè)時(shí)間點(diǎn)（復(fù)蘇開始后2h、6h、12h）均為8只。創(chuàng)傷組大鼠采用非致命性的創(chuàng)傷/失血性休克模型，即腹部切口加失血后復(fù)蘇，假創(chuàng)傷組大鼠同樣采用此模型但只給予血管插管但不進(jìn)行放血與復(fù)蘇，干預(yù)組大鼠于復(fù)蘇前5min尾靜脈注射Nec-11mg/kg，溶媒對(duì)照組大鼠于復(fù)蘇前5min尾靜脈注射同體積Nec-1溶媒二甲基亞砜(DMSO)。分別于復(fù)蘇開始后2、6、12h取大鼠肺組織進(jìn)行HE染色病理檢查并評(píng)分、支氣管肺泡灌洗液蛋白質(zhì)含量檢測(cè)、應(yīng)

3、用Western blot法檢測(cè)程序性壞死的特異性蛋白受體交互作用蛋白1(RIP1)及RIP3、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)程序性壞死細(xì)胞比例。
　　結(jié)果:
　　1.假創(chuàng)傷組大鼠各時(shí)間點(diǎn)肺組織HE染色病理切片顯微鏡檢查無明顯變化，組織病理學(xué)評(píng)分無差異(p＞0.05);創(chuàng)傷組大鼠各時(shí)間點(diǎn)肺組織鏡檢均較假創(chuàng)傷組有明顯變化，并有在明顯評(píng)分上有明顯差異（p均＜0.01），且在復(fù)蘇后12h內(nèi)隨時(shí)間延長(zhǎng)而損傷加重（p均＜0.05），各時(shí)間點(diǎn)溶媒對(duì)照組

4、病理變化與創(chuàng)傷組大鼠無明顯差別(p＞0.05);干預(yù)組大鼠各時(shí)間點(diǎn)肺組織病理變化較假創(chuàng)傷組仍有明顯變化，但較創(chuàng)傷組對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)病理表現(xiàn)明顯較輕(p＜0.05)，病理改變?nèi)噪S時(shí)間延長(zhǎng)而明顯。
　　2.假創(chuàng)傷組大鼠BALF中蛋白質(zhì)含量在各時(shí)間點(diǎn)無明顯差異(p＞0.05);創(chuàng)傷組大鼠各時(shí)間點(diǎn)BALF中蛋白質(zhì)含量均較假創(chuàng)傷組明顯增高（p均＜0.01），且隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸增高(p＜0.01);各時(shí)間點(diǎn)溶媒對(duì)照組大鼠與創(chuàng)傷組大鼠均無明顯差異(p＞

5、0.05);干預(yù)組大鼠6h內(nèi)BALF中蛋白質(zhì)含量較創(chuàng)傷組有無明顯減少(p＞0.05)，12h時(shí)較創(chuàng)傷組減少(p＜0.05);但干預(yù)組各時(shí)間點(diǎn)BALF中蛋白質(zhì)含量仍明顯高于假創(chuàng)傷組（p均＜0.05）。
　　3.創(chuàng)傷組大鼠各時(shí)間點(diǎn)肺RIP1和RIP3表達(dá)量較假創(chuàng)傷組均明顯增高(p均＜0.01)，且隨時(shí)間延長(zhǎng)而增高(p＜0.01);假創(chuàng)傷組各時(shí)間點(diǎn)無明顯變化(p＞0.05);各時(shí)間點(diǎn)溶媒對(duì)照組大鼠肺RIP1和RIP3表達(dá)量與創(chuàng)傷組大鼠均

6、無明顯差異(p＞0.05);干預(yù)組大鼠肺組織RIP1和RIP3表達(dá)量在6h至12h均明顯低于創(chuàng)傷組。
　　4.創(chuàng)傷組大鼠肺組織程序性壞死細(xì)胞比例隨時(shí)間延長(zhǎng)而增高(p＜0.01)，且各時(shí)間點(diǎn)較假創(chuàng)傷組均有明顯升高（p均＜0.01）;溶媒對(duì)照組大鼠各時(shí)間點(diǎn)與創(chuàng)傷組大鼠無明顯差異（p均＞0.05）;干預(yù)組大鼠肺組織程序性壞死細(xì)胞比例在各時(shí)間點(diǎn)均明顯低于創(chuàng)傷組大鼠（p均＜0.01），開始復(fù)蘇后2h時(shí)與假創(chuàng)傷組大鼠無明顯變化(p＞0.05)

7、，但在6h及12h時(shí)間點(diǎn)仍高于假創(chuàng)傷組（p均＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　1.創(chuàng)傷失血性休克能導(dǎo)致大鼠肺損傷:毛細(xì)血管通透性增高、充血、出血、微血栓形成，肺泡及肺間質(zhì)內(nèi)富含蛋白質(zhì)液體滲出及大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，并且在12h內(nèi)隨時(shí)間延長(zhǎng)有逐漸加重趨勢(shì)。而Nec-1能夠部分抑制這種現(xiàn)象的發(fā)生。
　　2.大鼠創(chuàng)傷失血性休克所致肺損傷中存在細(xì)胞程序性壞死現(xiàn)象，且在復(fù)蘇后12h內(nèi)隨時(shí)間延長(zhǎng)而增多。Nec-1能夠部分抑制創(chuàng)傷失血性休