雌二醇—腸黏膜肥大細胞—迷走傳入神經5-HT3R通路參與胃腸傷害性刺激反應調控機制的初步研究.pdf

1、背景：內臟高敏感反應是腸易激綜合征（irritable bowel syndrome,IBS）的核心發(fā)病機制。IBS 女性多發(fā)，提示雌激素參與IBS 內臟高敏感發(fā)病機制。但臨床上，育齡期和絕經期婦女的IBS 癥狀對雌激素水平的反應呈矛盾現(xiàn)象（月經期雌激素水平下降時IBS 癥狀易發(fā)或加重；絕經期婦女補充雌激素可能誘發(fā)IBS）。這一現(xiàn)象尚無合理的機制來解釋。綜合迄今的相關研究進展，參與胃腸內臟痛反應神經調控通路有兩條：①腦和脊髓感覺反應通路

2、，②迷走傳入神經抑制性調控通路。雌激素水平對IBS 癥狀產生不同影響結果的臨床現(xiàn)象很可能是與雌激素對兩條神經調控通路的影響不平衡有關。眾多的研究顯示雌激素對于脊髓通路的作用是易化效應，但參與迷走神經通路的機制尚未見研究。闡明雌激素參與迷走神經通路的機制是解決上述理論問題的關鍵之一。
　　 目的：初步證實雌激素激活腸黏膜肥大細胞脫顆粒產生5-HT，再經迷走傳入神經5-HT3Rs 神經信號途徑參與抑制性調控胃腸傷害性刺激的反應機制。

3、為雌激素參與IBS 發(fā)病的機制研究和腸道干預策略的開發(fā)提供新思路。
　　 方法：第一部分：腸黏膜雌激素作用對大鼠胃腸傷害性刺激反應的調控作用研究。采用正常雌性雙側卵巢切除SD 大鼠為實驗動物，以結直腸擴張（colorectal distension, CRD60 mmHg）引起的大鼠20s內腹肌收縮反應（visceromotor response, VMR）評估胃腸內臟傷害性刺激引起的反應，對照研究雌激素體循環(huán)給藥（腹腔注射）和

4、腸粘膜給藥（十二指腸灌注）兩條途徑雌激素調控胃腸內臟傷害性刺激反應的不同效應。實驗動物分別設空白組和生理鹽水給藥對照組。實驗組分別給予①腹腔注射雌二醇，②腸腔灌注雌二醇。灌藥后用PowerLab 4/25 多道生理信號采集處理系統(tǒng)記錄腹肌收縮電位對CRD的反應。
　　 第二部分：腸黏膜雌激素作用調控胃腸內臟傷害性刺激反應的神經通路研究。對照研究迷走神經手術切除、藥物阻斷（利多卡因和Capsaicine）對腸黏膜雌激素的調控效應，

5、分別設空白組、假手術及生理鹽水給藥組對照。實驗組分別給予①迷走神經切除，②利多卡因迷走神經處理，③Capsaicine 迷走神經處理后腸腔灌注雌二醇記錄CRD 后VMR。并以免疫組化方法觀察不同途徑（體循環(huán)和腸黏膜）雌激素給藥對迷走神經下神經節(jié)以及NTX 核團c-fos 表達的影響。免疫組化實驗動物分為腸腔灌注雌二醇組、腹腔注射雌二醇組和腹腔灌注生理鹽水對照組。
　　 第三部分：雌激素-迷走傳入通路的神經遞質研究。采用肥大細胞穩(wěn)

6、定劑、選擇性5-HT3R 阻斷藥等對照研究腸腔灌注雌激素對去卵巢大鼠胃腸內臟傷害性刺激反應的影響。實驗組分別給予①肥大細胞穩(wěn)定劑、②選擇性5-HT3R 阻斷藥和③H1 受體阻斷劑后再腸腔灌注雌二醇后記錄CED 后VMR，設空白組對照。
　　 結果：第一部分：①腸腔灌注雌二醇CRD 后VMR（91.90±13.24）與空白組（118.9±6.285）和生理鹽水對照組（114.7±3.799）相比明顯下降，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.

7、01 對生理鹽水，P<0.001 對基線）。
　　 ②腹腔注射雌二醇CRD 后VMR（434.0±16.50）與空白組（111.3±2.923）和生理鹽水對照組（114.7±3.799）相比明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.001）。
　　 第二部分：①迷走神經切除組腸腔灌注雌二醇后CRD 后VMR（135.1±12.920）與空白組（138.6±6.276）和生理鹽水對照組（138.7±4.466）相比無明顯變化，無

8、統(tǒng)計學差異。假手術組腸腔灌注雌二醇后CRD 后VMR(94.42±13.240)與空白組（119.70 ±6.285）和生理鹽水對照組（114.3±3.799）相比有統(tǒng)計學差異（P<0.001）。
　　 手術組和假手術組腸腔灌注雌二醇CRD 后VMR 相比有統(tǒng)計學差異P<0.001）。②利多卡因處理迷走神經腸腔灌注雌二醇后CRD 后VMR（134.6±14.46）與空白組（139.1±7.481）和生理鹽水對照組(139.7±7

9、.027)相比無統(tǒng)計學差異。③辣椒素Capsaicin 阻斷迷走神經后腸腔灌注雌二醇后CRD 后VMR(133.5±15.00)與空白組（138.1±8.079）和生理鹽水對照組（141.2±6.097）相比無明顯變化，差異無統(tǒng)計學意義。免疫組化結果顯示腸腔雌二醇灌注組孤束核神經元細胞核內表達c-Fos 明顯高于腸腔灌注生理鹽水對照組和腹腔注射雌二醇組。
　　 第三部分：①肥大細胞穩(wěn)定劑處理后腸腔灌注雌二醇CRD 后VMR（14

10、8.0±8.652）與空白組（151.2±8.885）相比無明顯變化，無統(tǒng)計學差異。②腸腔灌注5-HT3 受體阻斷劑格拉斯瓊CRD 后VMR 值（134.82±13.68），15min 后再灌注雌二醇CRD 后VMR 值（137.5±18.100）與空白組相比（125.78±6.38）有明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。③腸腔灌注H1 受體阻斷劑3 天后CRD 后VMR（153.1±18.48），再灌注雌二醇CRD 后VMR（