真菌環(huán)氧二烯聚酮MED和環(huán)酯肽WAP-8294A2生物合成途徑的研究.pdf

1、在新藥發(fā)現(xiàn)過程中,天然產(chǎn)物仍然是開發(fā)新藥特別是發(fā)現(xiàn)新的藥物先導(dǎo)化合物的最重要源泉。目前已從紅樹林植物內(nèi)生真菌中分到大量結(jié)構(gòu)新穎,且具有抗菌和(或者)抗腫瘤等活性的天然產(chǎn)物,包括生物堿、大環(huán)內(nèi)酯、環(huán)肽、醌類、萜類、聚醚類、甾醇類、多糖類以及脂肪酸類等,為新藥的篩選和研發(fā)提供了豐富的模式結(jié)構(gòu)。
　　 本篇論文第一篇介紹了紅樹內(nèi)生真菌Phomopsis sp.A123的去乙酰基真菌環(huán)氧二烯高產(chǎn)突變株A818的次級(jí)代謝產(chǎn)物分離和結(jié)構(gòu)鑒定

2、。經(jīng)過細(xì)致的分離和詳細(xì)的結(jié)構(gòu)解析,從該突變株中分離得到21個(gè)真菌環(huán)氧二烯類化合物,其中包括含有α,β-不飽和-δ-內(nèi)酯結(jié)構(gòu)的mycoepoxydiene(MED),deacylmycoepoxydiene(DAM),2,3-dihydromycoepoxydiene(2H-MED),12-hydromycoepoxydiene(A818-37),和含有α,β-不飽和-γ-內(nèi)酯的Z-1893A及其的對(duì)應(yīng)異構(gòu)體E-1893A,1893B及去

3、乙?；苌飀eacety1-1893B。21個(gè)真菌環(huán)氧二烯類化合物中有15個(gè)為首次發(fā)現(xiàn)的、新的真菌環(huán)氧二烯,包括12-hydromycoepoxydiene,deacety1-1893B及13個(gè)含有直鏈脂肪酸的真菌環(huán)氧二烯;1個(gè)具有新骨架結(jié)構(gòu)的七元環(huán)內(nèi)酯A818-19;1個(gè)新十元環(huán)內(nèi)酯Z-4-6;及7個(gè)異苯并呋喃酮,其中4個(gè)為新結(jié)構(gòu);兩個(gè)結(jié)構(gòu)已知的松胞菌素類化合物。
　　 本論文第二篇的研究是通過真菌PKS的異源表達(dá),基因敲除

4、以及RNA干擾等技術(shù),以闡明從菌株A123基因組cDNA文庫中篩選得到兩條PKS基因與真菌環(huán)氧二烯類化合物生物合成之間的關(guān)系。盡管目前已獲得的數(shù)據(jù)尚未能正式確認(rèn)目的PKS與該類化合物合成之間的關(guān)系,但為后續(xù)工作的繼續(xù)開展奠定了基礎(chǔ)。
　　 產(chǎn)酶溶桿菌L.enzymogenes可以產(chǎn)生大量具有不同生物活性的代謝產(chǎn)物,但對(duì)產(chǎn)酶溶桿菌L.enzymogenes代謝產(chǎn)物產(chǎn)生途徑調(diào)節(jié)的研究幾乎沒有。本論文通過對(duì)產(chǎn)酶溶桿菌L.enzymog

5、enes C3產(chǎn)生的PKS/NRPS雜合化合物抗真菌活性因子dihydromaltophilin(HSAF)合成調(diào)控的研究,成功確定了成對(duì)基因clp和GNAT對(duì)HSAF的生物合成具有正調(diào)控作用,為首次建Lysobacter屬抗生素生物合成的調(diào)節(jié)模型。本篇論文同時(shí)通過確定的3個(gè)氯霉素酰基化衍生物的結(jié)構(gòu),推測(cè)GNAT基因在氯霉素的生物轉(zhuǎn)化過程中具有關(guān)鍵作用,賦予產(chǎn)酶溶桿菌L.enzymogenesC3特殊的氯霉素抗性機(jī)制。
　　 本

6、論文在研究真菌聚酮類化合物生物合成基因簇的同時(shí),也對(duì)產(chǎn)酶溶桿菌Lysobacter enzymogenses OH11l產(chǎn)生的,具有抗MRsA活性的NRPS化合物WAP-8294A2進(jìn)行了深入的研究,并首次確立該類化合物的生物合成基因簇為一條長(zhǎng)達(dá)63,187 bp基因簇(命名為WAPS),這條基因簇包含一個(gè)由7個(gè)模塊組成的WAPs1和一個(gè)由5個(gè)模塊模塊組成的WAPS2,兩個(gè)NRPSs緊密相連,一共含有45個(gè)結(jié)構(gòu)域,是目前發(fā)現(xiàn)的最大的NR