LKB1、β-catenin及IFITM1在Peutz-Jeghers綜合征的表達及其臨床意義的研究.pdf

1、Peutz-Jeghers綜合征（PJS）是以皮膚黏膜黑色素沉著和胃腸道多發(fā)息肉為特征的常染色體顯性遺傳病。其臨床發(fā)病率各地報道在1/120000-1/8300[1]之間。McGarrity等初步研究認為，95%以上的病例出現皮膚黏膜黑斑，20歲以后95%的病例出現腸內的PJS息肉[2]。PJS息肉散布于胃腸道的各個部位，息肉的病理類型各不相同，主要為錯構瘤，且多次復發(fā)，目前PJS發(fā)病機制、惡變進展未完全闡明。 早期認為PJS癌

2、變的幾率很小，但近年研究表明，錯構瘤本身可能演變?yōu)橄倭龊桶?，即存在著由錯構瘤→腺瘤→腺癌的演變過程，也可能通過de nove的惡變途徑發(fā)生胃腸道及其以外的其它臟器的惡性腫瘤[3-5]。PJS是一種癌易感綜合征，約93%PJS患者在平均年齡43歲時可進展為癌[6]，高度提示PJS與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關。 LKB1基因是目前公認的PJS相關致病基因[7]，LKB1的胚系突變是PJS的主要致病因素，但只在60%家族性和50%散發(fā)性P

3、JS患者中檢測出[8]，提示另有其它位點的基因參與了錯構瘤的形成及發(fā)展[9-10]。LKB1在染色質重構、細胞周期抑制、Wnt信號轉導、細胞極性排列和能量代謝方面都起著重要作用[11]，但其生物學功能尚未得到全面的揭示。有研究表明LKB1是影響Wnt/β-catenin通路的關鍵分子，并證實LKB1雖不能引發(fā)Wnt通路的激活，但可作為β-catenin的上游調控因子，調控Wnt通路相關基因的表達，是經典Wnt通路激活的必需因子[12]。

4、Wnt/β-catenin途徑與多種消化道腫瘤的發(fā)生有關。Wnt/β-catenin信號傳導通路包括近來研究較多的IFITM1是目前已知的胚胎發(fā)育所必須的轉導途徑，同時在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中也占據著重要地位[13]。IFITM1在Wnt/β-catenin調控的腸胚發(fā)育及腫瘤形成過程中起關鍵作用，其為Wnt/β-catenin信號通路下游的重要調控因子[14、15]。IFITM1位于人類染色體11p15.5，該區(qū)的缺失與人類許多類型的腫瘤

5、的發(fā)生發(fā)展有關，在小鼠模型中研究發(fā)現Wnt/β-catenin信號通路調控IFITM1的表達，且與LKB1之間存在錯綜復雜的聯系。PJS的發(fā)病機理可能有Wnt通路的參與[16-18]，β-catenin基因突變可促進錯構瘤息肉的惡變進展，從而使PJS患者的癌易感性增加。 研究表明LKB1、β-catelun和IFITM1參與了胚胎早期的發(fā)育調控[11-13]，Wnt/β-catenin的激活及IFITM1的高表達與細胞增殖及腫瘤

6、的發(fā)生發(fā)展密切相關，但與LKB1之間的作用仍不十分清楚，目前有研究提示其在腫瘤形成中發(fā)揮“管家”基因的功能。近年IFITM1在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用越來越受到人們的重視，其在結腸異常隱窩灶和早期瘤變即可高水平表達。Β-catenin及IFITM1蛋白的異常表達可能是大腸腺瘤癌變的早期重要環(huán)節(jié)[19]。且IFITM1、β-catenin、LKB1在PJS中發(fā)生發(fā)展及相關關系，國內外鮮有報道。 研究目的: 通過檢測PJS息肉組

7、織LKB1、β-catenin、IFITM1 mRNA及其蛋白表達，結合臨床病理特征，探討三者在PJS息肉發(fā)生及惡變中的作用，為進一步臨床診治及預后判斷提供實驗依據。 材料與方法: 1.LKB1、β-catenin、IFITM1 mRNA檢測：收集14例PJS息肉、14例結直腸腺瘤、14例結直腸腺癌、12例癌旁正常黏膜，針對其基因CDS區(qū)設計引物，通過PT-PCR法，檢測其mRNA表達水平。 2.LKB1、β-c

8、atenin、IFITM1蛋白組織表達檢測：選取20例PJS息肉、25例結直腸腺瘤、25例結直腸癌、20例癌旁正常組織石蠟標本，通過免疫組織化學法在同一組織來源標本的連續(xù)切片中檢測LB1、β-catenin、IFITM1蛋白表達部位及陽性表達率。 3.IFITM1的蛋白表達水平：14例PJS息肉組織、14例結直腸腺瘤、14例結直腸腺癌、12例癌旁正常黏膜的新鮮組織標本，通過Westernblot法檢測IFITM1蛋白表達水平。

9、 4.β-catenin、IFITM1共定位表達檢測：選取14例PJS息肉、14例結直腸腺瘤、12例結直腸腺癌、12例癌旁正常組織石蠟標本，通過免疫熒光法檢測β-catenin、IFITM1蛋白共定位表達。 統(tǒng)計學方法: 采用SPSS13.0軟件包進行統(tǒng)計學分析，RT-PCR，Westernblot，免疫熒光實驗數據為計量資料，采用多組比較進行單向方差分析（One-way ANOVA），以x+s表示，以F為統(tǒng)計量；

10、計數資料（免疫組化）采用秩和檢驗方法（Kruskal-Wallis H）及R×CX2法，以X2為統(tǒng)計量；LB1、β-catenin、IFITM1之間表達水平的相關分析采用偏相關分析方法。以雙側α=0.05作為檢驗水準，檢驗標準以P<0.05為有顯著性差異。 結論: 1.正常組織、PJS息肉、腺瘤、腺癌組織中，LKB1、β-catenin、IFITM1 mRNA水平逐漸升高。在PJS息肉、腺瘤、腺癌中LKB1與β-cate

11、nin及IFITM1的表達量呈正相關。 2.LKB1，β-catenin，IFITM1蛋白表達強度隨著腫瘤惡性程度增加逐漸增強，與細胞的異型性也密切相關；三者的表達水平在腫瘤組織中兩兩之間呈正相關關系。PJS組織、腺瘤組織、腺癌組織及正常組織中，β-catenin蛋白膜表達缺失率、胞漿表達具有顯著差異。Β-catenin在PJS中呈異質性表達；PJS錯構瘤息肉中LKB1有表達的病例中，β-catenin存在異位表達。而在LKB1

12、表達缺失的PJS中，β-catenin呈膜表達，未見漿表達，IFITM1低表達或不表達。 3.Westernblot結果顯示IFITM1蛋白在結腸癌中表達最高，腺瘤次之，PJS表達低于腺瘤，相對應的癌旁正常組織表達最低，證實了免疫組化的結果。 4.β-catenin、IFITM1共表達的雙標記陽性細胞廣泛存在。在癌旁正常組織雙標記陽性細胞在細胞膜上呈弱表達，在PJS組織，結直腸腺瘤和腺癌中陽性細胞表達增強，且在胞漿中有表