LKB1、β-catenin及IFITM1在Peutz-Jeghers綜合征的表達(dá)及其臨床意義的研究.pdf

1、Peutz-Jeghers綜合征（PJS）是以皮膚黏膜黑色素沉著和胃腸道多發(fā)息肉為特征的常染色體顯性遺傳病。其臨床發(fā)病率各地報(bào)道在1/120000-1/8300[1]之間。McGarrity等初步研究認(rèn)為，95%以上的病例出現(xiàn)皮膚黏膜黑斑，20歲以后95%的病例出現(xiàn)腸內(nèi)的PJS息肉[2]。PJS息肉散布于胃腸道的各個(gè)部位，息肉的病理類型各不相同，主要為錯(cuò)構(gòu)瘤，且多次復(fù)發(fā)，目前PJS發(fā)病機(jī)制、惡變進(jìn)展未完全闡明。 早期認(rèn)為PJS癌

2、變的幾率很小，但近年研究表明，錯(cuò)構(gòu)瘤本身可能演變?yōu)橄倭龊桶?，即存在著由錯(cuò)構(gòu)瘤→腺瘤→腺癌的演變過(guò)程，也可能通過(guò)de nove的惡變途徑發(fā)生胃腸道及其以外的其它臟器的惡性腫瘤[3-5]。PJS是一種癌易感綜合征，約93%PJS患者在平均年齡43歲時(shí)可進(jìn)展為癌[6]，高度提示PJS與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。 LKB1基因是目前公認(rèn)的PJS相關(guān)致病基因[7]，LKB1的胚系突變是PJS的主要致病因素，但只在60%家族性和50%散發(fā)性P

3、JS患者中檢測(cè)出[8]，提示另有其它位點(diǎn)的基因參與了錯(cuò)構(gòu)瘤的形成及發(fā)展[9-10]。LKB1在染色質(zhì)重構(gòu)、細(xì)胞周期抑制、Wnt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞極性排列和能量代謝方面都起著重要作用[11]，但其生物學(xué)功能尚未得到全面的揭示。有研究表明LKB1是影響Wnt/β-catenin通路的關(guān)鍵分子，并證實(shí)LKB1雖不能引發(fā)Wnt通路的激活，但可作為β-catenin的上游調(diào)控因子，調(diào)控Wnt通路相關(guān)基因的表達(dá)，是經(jīng)典Wnt通路激活的必需因子[12]。

4、Wnt/β-catenin途徑與多種消化道腫瘤的發(fā)生有關(guān)。Wnt/β-catenin信號(hào)傳導(dǎo)通路包括近來(lái)研究較多的IFITM1是目前已知的胚胎發(fā)育所必須的轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，同時(shí)在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中也占據(jù)著重要地位[13]。IFITM1在Wnt/β-catenin調(diào)控的腸胚發(fā)育及腫瘤形成過(guò)程中起關(guān)鍵作用，其為Wnt/β-catenin信號(hào)通路下游的重要調(diào)控因子[14、15]。IFITM1位于人類染色體11p15.5，該區(qū)的缺失與人類許多類型的腫瘤

5、的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，在小鼠模型中研究發(fā)現(xiàn)Wnt/β-catenin信號(hào)通路調(diào)控IFITM1的表達(dá)，且與LKB1之間存在錯(cuò)綜復(fù)雜的聯(lián)系。PJS的發(fā)病機(jī)理可能有Wnt通路的參與[16-18]，β-catenin基因突變可促進(jìn)錯(cuò)構(gòu)瘤息肉的惡變進(jìn)展，從而使PJS患者的癌易感性增加。 研究表明LKB1、β-catelun和IFITM1參與了胚胎早期的發(fā)育調(diào)控[11-13]，Wnt/β-catenin的激活及IFITM1的高表達(dá)與細(xì)胞增殖及腫瘤

6、的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，但與LKB1之間的作用仍不十分清楚，目前有研究提示其在腫瘤形成中發(fā)揮“管家”基因的功能。近年IFITM1在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用越來(lái)越受到人們的重視，其在結(jié)腸異常隱窩灶和早期瘤變即可高水平表達(dá)。Β-catenin及IFITM1蛋白的異常表達(dá)可能是大腸腺瘤癌變的早期重要環(huán)節(jié)[19]。且IFITM1、β-catenin、LKB1在PJS中發(fā)生發(fā)展及相關(guān)關(guān)系，國(guó)內(nèi)外鮮有報(bào)道。 研究目的: 通過(guò)檢測(cè)PJS息肉組

7、織LKB1、β-catenin、IFITM1 mRNA及其蛋白表達(dá)，結(jié)合臨床病理特征，探討三者在PJS息肉發(fā)生及惡變中的作用，為進(jìn)一步臨床診治及預(yù)后判斷提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 材料與方法: 1.LKB1、β-catenin、IFITM1 mRNA檢測(cè)：收集14例PJS息肉、14例結(jié)直腸腺瘤、14例結(jié)直腸腺癌、12例癌旁正常黏膜，針對(duì)其基因CDS區(qū)設(shè)計(jì)引物，通過(guò)PT-PCR法，檢測(cè)其mRNA表達(dá)水平。 2.LKB1、β-c

8、atenin、IFITM1蛋白組織表達(dá)檢測(cè)：選取20例PJS息肉、25例結(jié)直腸腺瘤、25例結(jié)直腸癌、20例癌旁正常組織石蠟標(biāo)本，通過(guò)免疫組織化學(xué)法在同一組織來(lái)源標(biāo)本的連續(xù)切片中檢測(cè)LB1、β-catenin、IFITM1蛋白表達(dá)部位及陽(yáng)性表達(dá)率。 3.IFITM1的蛋白表達(dá)水平：14例PJS息肉組織、14例結(jié)直腸腺瘤、14例結(jié)直腸腺癌、12例癌旁正常黏膜的新鮮組織標(biāo)本，通過(guò)Westernblot法檢測(cè)IFITM1蛋白表達(dá)水平。

9、 4.β-catenin、IFITM1共定位表達(dá)檢測(cè)：選取14例PJS息肉、14例結(jié)直腸腺瘤、12例結(jié)直腸腺癌、12例癌旁正常組織石蠟標(biāo)本，通過(guò)免疫熒光法檢測(cè)β-catenin、IFITM1蛋白共定位表達(dá)。 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法: 采用SPSS13.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，RT-PCR，Westernblot，免疫熒光實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)為計(jì)量資料，采用多組比較進(jìn)行單向方差分析（One-way ANOVA），以x+s表示，以F為統(tǒng)計(jì)量；

10、計(jì)數(shù)資料（免疫組化）采用秩和檢驗(yàn)方法（Kruskal-Wallis H）及R×CX2法，以X2為統(tǒng)計(jì)量；LB1、β-catenin、IFITM1之間表達(dá)水平的相關(guān)分析采用偏相關(guān)分析方法。以雙側(cè)α=0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)以P<0.05為有顯著性差異。 結(jié)論: 1.正常組織、PJS息肉、腺瘤、腺癌組織中，LKB1、β-catenin、IFITM1 mRNA水平逐漸升高。在PJS息肉、腺瘤、腺癌中LKB1與β-cate

11、nin及IFITM1的表達(dá)量呈正相關(guān)。 2.LKB1，β-catenin，IFITM1蛋白表達(dá)強(qiáng)度隨著腫瘤惡性程度增加逐漸增強(qiáng)，與細(xì)胞的異型性也密切相關(guān)；三者的表達(dá)水平在腫瘤組織中兩兩之間呈正相關(guān)關(guān)系。PJS組織、腺瘤組織、腺癌組織及正常組織中，β-catenin蛋白膜表達(dá)缺失率、胞漿表達(dá)具有顯著差異。Β-catenin在PJS中呈異質(zhì)性表達(dá)；PJS錯(cuò)構(gòu)瘤息肉中LKB1有表達(dá)的病例中，β-catenin存在異位表達(dá)。而在LKB1

12、表達(dá)缺失的PJS中，β-catenin呈膜表達(dá)，未見漿表達(dá)，IFITM1低表達(dá)或不表達(dá)。 3.Westernblot結(jié)果顯示IFITM1蛋白在結(jié)腸癌中表達(dá)最高，腺瘤次之，PJS表達(dá)低于腺瘤，相對(duì)應(yīng)的癌旁正常組織表達(dá)最低，證實(shí)了免疫組化的結(jié)果。 4.β-catenin、IFITM1共表達(dá)的雙標(biāo)記陽(yáng)性細(xì)胞廣泛存在。在癌旁正常組織雙標(biāo)記陽(yáng)性細(xì)胞在細(xì)胞膜上呈弱表達(dá)，在PJS組織，結(jié)直腸腺瘤和腺癌中陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)增強(qiáng)，且在胞漿中有表