Ⅱ型菊酯類農(nóng)藥廣譜特異性抗體的制備和多殘留免疫技術(shù)建立.pdf

1、擬除蟲菊酯類農(nóng)藥由于具有較高的殺蟲活性和低的哺乳動(dòng)物毒性，被廣泛應(yīng)用在農(nóng)業(yè)、林業(yè)、畜牧業(yè)及家庭衛(wèi)生中。盡管擬除蟲菊酯類農(nóng)藥對(duì)于人類是相對(duì)安全的，但如果擬除蟲菊酯類農(nóng)藥大量的暴露，則會(huì)引起對(duì)人類免疫系統(tǒng)的危害，如造成淋巴結(jié)和脾臟的傷害甚至于癌變，因?yàn)檫@些潛在危害的存在，建立一種靈敏、快速、有選擇性的擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法是十分必要的。免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)是農(nóng)藥及其代謝物重要的快速分析方法之一，具有靈敏度高，特異性強(qiáng)等特點(diǎn)。本文進(jìn)行了Ⅱ型菊

2、酯類農(nóng)藥免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的研究，主要研究結(jié)果如下： 1.利用高錳酸鉀氧化，將氯氰菊酯原藥分子結(jié)構(gòu)中環(huán)丙烷部分的雙鍵結(jié)構(gòu)打開，引入-COOH活性基團(tuán)，設(shè)計(jì)合成了模擬氯氰菊酯特征結(jié)構(gòu)的半抗原(RS)-α氰基-3-苯氧基芐基(RS)-cis,trans-2，2-二甲基-3-羧基-環(huán)丙烷羧酸酯；利用活性酯法將半抗原與牛血清蛋白和卵清蛋白進(jìn)行偶聯(lián)，制備人工抗原。半抗原通過核磁共振、紅外光譜掃描、高分辨質(zhì)譜等鑒定，人工抗原通過紫外吸收掃描法鑒

3、定，證明半抗原和人工抗原均為設(shè)計(jì)所需產(chǎn)物。 2.以半抗原-BSA和半抗原-OVA作為免疫原，免疫新西蘭大白兔，獲得了多克隆抗體，經(jīng)間接非競(jìng)爭(zhēng)ELISA法檢測(cè)表明以半抗原-BSA免疫兔子制備的抗血清效價(jià)達(dá)1：25600，利用方陣滴定法確定了包被原與抗血清的工作濃度：包被原的工作濃度為0.5μg/ml，抗血清稀釋度為1：12000。 3.用抗血清建立了間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA(IC-ELISA)檢測(cè)方法。確定了IC-ELISA檢測(cè)