periostin抗體的制備和periostin組織表達(dá)特異性的研究

1、· 7 5 4·實』 I 1fI 腔醫(yī)學(xué) 雜志( JP r a t tS t o m a t o 1 ) 2 0 0 5N o v ， 2 1 ( 6 )P e r i o s t i n抗體 的制 備 和 P e r i o s t i n萬玲 吳織芬 袁乃梅 陳平 組 織表 達(dá)特 異 性 的研 究 【 摘 要】目的 ： 制備抗 P e r i o s t i n 抗體 ， 斤 解 P e r i o s t i

2、n的組織表達(dá)特性 。方法 ： 以重組 、 純化 的小 鼠 t ) e r i o s t i n 為抗 原， 混人 F r e u n d完全倔劑 充分乳化 ， 免疫新西 蘭大 兔 ； 用 雙向免疫擴 散 試聆 檢測抗 體效價 ， 將 獲得 的多 克降抗 m清初 步純化后 ， 用 We s t e r nb l o t 干 ¨ 免疫組化檢 測小 鼠 P e r i o s t i n的組織 表達(dá)特 異性 。結(jié)果 ： We s

3、t e r nb l o t示 P e r i o s t i n 存小 鼠顱蓋骨 及牙周組織 總蚩I{} J 有特異性 表達(dá) ，在肝 、 腎和腦組 織總蛋白中沒 有表達(dá)。免疫 組化柃洲 ， 下頜骨表而骨膜和牙_ I 吉 J 膜組 f 1 的 P e r i o s t i n染色呈強 陽性 ， 而在 牙骨質(zhì) 、 牙本質(zhì) 、 牙槽骨 和牙髓組織 中則為陰性 ， 并 且它不足粘附于細(xì)胞太 ， 而足分布在 由成骨 細(xì)胞 和牙周膜 細(xì)胞分 泌

4、于其周 的細(xì)胞 外基質(zhì) 中 ， 牙槽骨中的骨細(xì)胞 也 產(chǎn)牛 P e r i o s t i n結(jié) 論： P e r i o s t i n這種存有 目彤成能 J 組織 中的高表達(dá) ，住成熟骨組 織 中無 表達(dá) 的特點提 示 _ r吖能 礦化紺織 的 期形成有 關(guān)?！?關(guān)鍵詞】細(xì)胞粘附分子 ； 牙周膜細(xì)胞 ； We s t e r nb l o tPr e p a r a t i o no fP e r i o s t i na n

5、t i b o d ya n dt h ee x p r e s s i o no fP e r i o s t i ni nm i c eWa nL i n g，WuZ hn，Y u a nNa i me i ，e ta 1 ． C o l l e g eS t o ma t o l o g y，eF o u r t hMi l i t a r yMe d i c a lU -n i v e r s i t y． X h n71 0

6、 0 3 2． Ci n a【 A b s t r a c t 】O b j e c t i v e ： T op r e p a r ear a b b i ta n t i — m o u s eP e r i o s t i nl g Ga n t i b o d ya n dt os t u d yt h ee x p r e s s i o no fP e r i o s t i ni nm i c e ． Me t h o

7、d s ： C o m p l e t eF r e u n da d j u v a n tw i t hr e c o m b i n a n tP e r i o s t i nw a su s e dt oi m m u n i z er a b b i t s ． Wh o l eb l o o dwa se o l l e c t e df r o mt h ea n i ma l sa f t e ri mmu n i z

8、 a t i o nf i ) r5t i me s ． S e r u m wa so b t a i n e dt ) yc e n t r i f u g a t i o n ． T h es p e c i f i cl g Ga n t i b o d ywa sp u r i f i e df r o m t h es e r u m b ya n l mo n i u m s u l f a t e ． r r o

9、 t a lp r o t e i ni s o l a t e df r o m mo u s el i v e r ，b r a i n，k i d n e ya n dc a l v a r i aa n dp e r i o d o n t a lt i s s u ew a su s e dt os t u d yt h ee x p r e s s i o no fP e r i o s t i ni nmi c eb y

10、We s t e r nb h ) t ，i mmu n o h i s t o —c h e m i c a ls t a i n i n gw a sa p p l i e dt oe x a m i n eP e r i o s t i ne x p r e s s i o ni nj a wt ) o n ea n dd e n t a lt i s s u e s ． Re s u l t s ： A n t i — P e

11、r i o s t i na n t i b o d ywi t ht h et i t e ro f12 8wa so b t a i n e d ． W e s t e r nt ) h ) ts h o we dt h a tt h e r ew a sas p e c i f i cb a n dn e a rMr9 00 0 0i nc a l —v a r i aa n dp e r i o d o n t a lt i s

12、 s u e s ，b u tn o ti nl i v e r ，b r a i na n dk i d n e y ． B yi mmu n o h i s t o c h e mi e a le x a mi n a t i o nP e r i o s t i nw a sd e t e c t e di nb o t hma n d i t ml a rp e r i n s t e u m a n dp e r i o d

13、 o n t a ll i g a me n t ， t r otn o ti nc e me n t u m，d e n t i n，a l v e o l a rt ) o n ea n ( 1d e n t a lp u l p ． Co n c l u s i o n： 1 ) e r i o s t l nma y [ ) l a yar o l ei nb o n ea n dp e r i o d o n t a lt i

14、 s s u ef i ) r ma t i u n ．【 K e yw o r d s 】C e l la d h e s i o nm o l e c u l e ； P e r i o d o n t a ll i g a m e n tc e l l s ； W e s t e r nb l o t中圖分類號： R 3 3 6 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 ： A文章編號： 1 0 0 1 — 3 7 3 3 ( 2 0 0 5 ) - 0 6

15、- 0 7 5 4 - 0 4P e r i o s t i n又 稱 為 成 骨 細(xì) 胞 特 異 性 因 子 2( o s t e o —b l a s t — s p e c i f i cf a c t o r2 ， O S F 一 2 ) ， 是 近 兒年來新 確定 的一 種骨 粘附分 子 ， 其相對 分子 質(zhì)量 約 9 00 0 0 ， 主要 由成 骨 細(xì)胞 及其前 體細(xì) 胞 所分 泌 產(chǎn) 生 ， 可 有 效促 進(jìn) 成 骨 細(xì)

16、 胞 的粘附和伸展 ， 并特異地表達(dá) 于骨膜和牙周膜組織 。目 前 尚木發(fā)現(xiàn)其它任何一種糖蛋 白( 包括 O C N、 O P N、O N、 B S P及 F N等 ) 具有類似的分 模式， 因此 ， P e r i o s —t i n可能 骨及 牙 等 礦化 組 織 的形 成 和再 生 過 程 中起 著獨 特作用 。為 了更 進(jìn)一 步 明確該 堡 白結(jié) 構(gòu)與 功能 之 作者單位 ： 兩安笫 四軍 醫(yī)大學(xué) r 1 腔醫(yī)院 牙周科 7

17、1 0 0 3 2 ( 萬玲 吳織 芬 袁乃梅)第 四軍醫(yī)大學(xué)分 子生物學(xué) 實驗室 ( 陳平)通訊作者 ： 萬玲 0 2 9 - 8 4 7 7 6 0 9 3間的關(guān) 系 ， 本 實驗 以重組 的 P e r i o s t i n融合 蛋 白為抗 原 ，免疫新西蘭大 白兔 ， 制備抗 P e r i o s t i n 抗體 ， 并進(jìn)行了蛋 白印跡 ( We s t e r nb l o t ) 和免疫 組化 檢測 。1 材料 和方

18、法 1 ． 1材 料 與動物 材料 ： 抗 原來 源 于在大 腸桿 菌 中表達(dá) 、 經(jīng)過 柱純化 的重組 P e r i o s t i n ( 第 四軍醫(yī)大學(xué)分子生物學(xué)實驗室 ) 。動物： 健康的 、 體質(zhì)量 1 ． 5k g 的雄性 新西蘭大 白兔 1只及 3 0d齡 的昆 明種小 鼠 2只( 第 四軍醫(yī) 大學(xué)動 物實驗中心提供) 。1 ． 2方 法 1 ． 2 ． 1雄性新西蘭大白兔的免疫? 對動物進(jìn)行常 維普資訊 http://

19、www.cqvip.com 】 啦¨ Ⅲ ¨ iJl 】 ~ l i I 廿 ? lJ I 圳 川 f — l i im x1H I t 1 、 I 1 1 I f 、 『 ”| 】i l i、 ? i『IJ K I { 『 l 、l 】 fI}Id l ~ l【、 ? xld 川 雌I i I¨i i im I ? I 1 1J Ⅱ^ f¨ l l【 ^ I l 1 ．． × 4

20、 ( ii ～ i I H【 ?? I 1 ’ fr l¨ 、 ¨I i | l ¨ T [ J i l ~ lr ? fr ? ㈣ i 【I InI 】 【l^l 【 ( ．i矗! { 、 絀 緗 “ 能 褂 花i f '^ 、 I， l化 II I k一 i q ¨ j ?制m、址r _ - k 一i ?-的 l l^l I 幢 F 『 J， ， ， “ f小． 1 ln『 』

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22、8;I t 對機鈀性蘭 大魂． - I薔 r ， 島 滴 恒 ¨多J 避抗 l n _ 清 ． J 1 野 }純 化． 』 nrtr t lI 一川¨ p s i ii ”組I 韭 選特 結(jié)il i , 1n小 恙 H墁圳圳織 總逝 I t t i lf 『 特異 性 喪 ．_ ¨ _ i t f自總蛋 jc i J ! J J 沒J 5 ． 謎 一納 l jF l l l ? tJ I 1刊 M (

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27、 『 究 lJ 科 【， l研 圮結(jié)止I I IJ^ I I ’ ” ¨r 圳 旭l J ¨rL _ _ H雌 t lJ l 山i i存于地活I(lǐng) 蜒 的 i ； 小訛 l．IiJ i 的 喪選旺限 f骨 慷巾的 、 IJ ’ m 肚 細(xì) 胞此 ii u s l i I ， _ l J 能州 控 成 HI 1竹成熟過} _ 起 弁承受竹 川”j越 _ j 盤 ：1 ： nq 『 。' l 巾 排什書 內(nèi)皮 繃

28、肝 世包 ? H， 可 能 h ” , s i ir lf t 川 J竹 虛胞 仆讎業(yè) 新‘ 卅 j 成 有，之 小研究 fL 抓 l』 JI一 -l i _ 1 的州織 喪c 土刊m 趣 ． ， C’ 化 組 戰(zhàn) · ¨ LJ J 圩{ 虬r lfl J‘何 『 _ ‘參 考 文 獻(xiàn) I i瑚 i 緗 紀(jì)挫匏 哺 ：r凡【 tIl 川i ． 1 9 9 7I521h l k 1“ Sh 『 k ? ? l