BSG和CKIP-1基因多態(tài)性與中國(guó)漢族人群性慢性充血性心力衰竭易感性的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、第一章中國(guó)人群BSG基因SNP的發(fā)掘及連鎖不平衡分析
　　目的：
　　Basigin(BSG)又稱為CD147或細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子(extracellular matrix metalloproteinase-inducer，EMMPRIN)，與惡性腫瘤的浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移、心血管結(jié)構(gòu)重構(gòu)、炎癥反應(yīng)以及細(xì)胞組織的分化和發(fā)育密切相關(guān)。本研究旨在查明健康中國(guó)漢族人群中BSG基因的單核苷酸多態(tài)性（single nucleotid

2、e polymorphism，SNP）分布及其連鎖不平衡情況。
　　方法：
　　隨機(jī)收集48例健康、無親緣關(guān)系的中國(guó)漢族人外周血液并提取基因組DNA，設(shè)計(jì)引物對(duì)所有個(gè)體BSG基因的啟動(dòng)子區(qū)、外顯子區(qū)和外顯子內(nèi)含子交界區(qū)的序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增和正反向測(cè)序，通過判讀測(cè)序峰圖，明確SNP的發(fā)生情況及其頻率;通過Hardy-Weinberg平衡分析、單倍型推測(cè)和連鎖不平衡分析，確定BSG基因位點(diǎn)的單倍型標(biāo)簽SNP(haplotypet

3、ag SNP，htSNP);中性理論檢驗(yàn)查明該基因位點(diǎn)SNP頻率分布是否符合選擇中性。
　　結(jié)果：
　　BSG基因位點(diǎn)共發(fā)現(xiàn)21個(gè)SNP，其中包括2個(gè)新發(fā)現(xiàn)的SNP6978G＞A和7949 C＞T;發(fā)掘到的17個(gè)常見SNP只有7個(gè)出現(xiàn)在HapMap數(shù)據(jù)庫(kù)中;所有SNP位點(diǎn)基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡。根據(jù)連鎖不平衡結(jié)構(gòu)，該基因位點(diǎn)共推測(cè)出4個(gè)單倍型域，確定其中9個(gè)SNP為單倍型標(biāo)簽SNP(haplotyp

4、e tag SNP，htSNP)。中性理論檢驗(yàn)結(jié)果提示健康中國(guó)漢族人群BSG基因的SNP分布符合中性進(jìn)化假說(Tajima'sD=1.75, P＞0.05; D*=0.48, P＞0.1; F*=1.14,P＞0.1)。
　　結(jié)論：
　　1)本研究首次對(duì)中國(guó)健康漢族人群BSG基因的SNP進(jìn)行了發(fā)掘，發(fā)現(xiàn)其2個(gè)新的SNP。
　　2)中國(guó)健康漢族人群BSG基因的SNP分布符合中性進(jìn)化假說。
　　3)中國(guó)漢族人群BSG

5、基因位點(diǎn)共確定有9個(gè)單倍型標(biāo)簽SNP，為在該群中研究BSG基因多態(tài)性與疾病易感性或藥物反應(yīng)性個(gè)體差異奠定了基礎(chǔ)。
　　第二章 BSG基因多態(tài)性與中國(guó)漢族人群慢性充血性心力衰竭的遺傳易感性研究
　　目的：
　　查明中國(guó)漢族人群中BSG基因多態(tài)性與慢性心衰(chronic congestiveheart failure，CHF)遺傳易感性的關(guān)聯(lián)關(guān)系。
　　方法：
　　收集770例CHF住院患者以及與之年齡、性別

6、相匹配486例漢族健康成年人的外周靜脈血標(biāo)本，酚氯仿抽提法提取所有受試者外周血DNA。通過PCR產(chǎn)物Sanger測(cè)序?qū)SG基因的4個(gè)單倍型標(biāo)簽單核苷酸多態(tài)性(SNP)rs1803202 C＞T、rs2229664 C＞G、rs4919862 C＞T和rs8259A＞T進(jìn)行基因分型;同時(shí)收集兩組人群的臨床和實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)。Logistic回歸分析每個(gè)位點(diǎn)SNP與CHF易感性間的關(guān)聯(lián)關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　在所有的CHF病例和

7、對(duì)照人群中，rs1803202 C＞T、rs2229664 C＞G、rs4919862 C＞T和rs8259 A＞T四個(gè)SNP位點(diǎn)低頻等位基因及各位點(diǎn)基因型的頻率分布無明顯差異;以是否吸煙以及CHF患者是否合并高血壓進(jìn)行分層分析發(fā)現(xiàn)，在非吸煙人群與非高血壓人群中，與rs8259 AA純合子基因型個(gè)體相比較，攜帶rs8259 T等位基因的個(gè)體心衰的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)顯著升高（非吸煙人群中:OR=1.357，95％可信區(qū)間為1.01-1.82，P=0

8、.042;非高血壓人群中:OR=1.777，95％可信區(qū)間為1.30-2.43，P＜0.001）。通過對(duì)CHF的危險(xiǎn)因素進(jìn)行校正，發(fā)現(xiàn)rs8259 T等位基因升高CHF發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的作用仍具有顯著意義（非吸煙人群:OR=1.82，95％可信區(qū)間為1.011-1.821，P=0.017;非高血壓人群:OR=1.459，95％可信區(qū)間為1.022-2.082,P=0.037)。
　　結(jié)論：
　　BSG基因rs8259 A＞T多態(tài)性與

9、中國(guó)漢族人群中非吸煙、非高血壓個(gè)體慢性心衰的遺傳易感性相關(guān)，攜帶rs8259 T等位基因的個(gè)體慢性心衰的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加。
　　第三章 CKIP-1 Pro21Ala多態(tài)性與中國(guó)漢族人群慢性充血性心力衰竭易感性的關(guān)聯(lián)研究
　　目的：
　　Akt是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，也稱蛋白激酶B，在調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞生長(zhǎng)、心肌血管新生、心肌細(xì)胞代謝和細(xì)胞凋亡等方面發(fā)揮重要作用。短期激活A(yù)kt可促進(jìn)心肌的生理性肥大，保護(hù)心肌損傷，而長(zhǎng)期激

10、活A(yù)kt則導(dǎo)致心肌病理性肥大和心力衰竭。酪蛋白激酶2相互作用蛋白1（casein kinase2-interacting protein-1，CKIP-1）是近年來發(fā)現(xiàn)的Akt相互作用蛋白，可抑制Akt的活性，穩(wěn)定表達(dá)CKIP-1可導(dǎo)致Akt失活，抑制細(xì)胞生長(zhǎng)。因此，CKIP-1表達(dá)水平或功能改變可能在心力衰竭的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。此部分研究旨在探討CKIP-1多態(tài)性與中國(guó)長(zhǎng)沙及周邊地區(qū)漢族人群心力衰竭遺傳易感性的關(guān)系。
　　方

11、法：
　　收集慢性心力衰竭病患者血液標(biāo)本842例，收集性別年齡相匹配的健康對(duì)照人群血液標(biāo)本803例;對(duì)Hapmap數(shù)據(jù)庫(kù)中國(guó)人群CKIP-1基因位點(diǎn)的SNP數(shù)據(jù)進(jìn)行分析;應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)法對(duì)CKIP-1 Pro21Ala(rs2306235 C＞G)多態(tài)性進(jìn)行基因分型;x2檢驗(yàn)比較病例和對(duì)照人群中基因型分布的異同，Logistic回歸分析確定CKIP-1 Pro21Ala多態(tài)性與CHF易感

12、性間的關(guān)聯(lián)關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　健康對(duì)照人群中CKIP-1 rs2306235多態(tài)位點(diǎn)CC、GC和GG基因型頻率分別為82.3％、17.4％和0.28％，慢性心力衰竭病病例中該位點(diǎn)CC、GC和GG基因型頻率分別為81.5％、17.2％和1.35％。該多態(tài)性位點(diǎn)基因型分布在病例和對(duì)照人群中均符合Hardy-Weinberg平衡。x2檢驗(yàn)結(jié)果表明，病例和對(duì)照人群中該位點(diǎn)GG基因型的頻率存在顯著差異，病例組rs2306235 G

13、G基因型頻率顯著高于對(duì)照人群(x2=4.92，P=0.0231)，但該基因型與CHF易感性的關(guān)系在校正CHF各風(fēng)險(xiǎn)因素后不明顯。根據(jù)CHF患者是否伴有高血壓進(jìn)行分層分析發(fā)現(xiàn)，Pro21Ala多態(tài)性與伴有高血壓的個(gè)體發(fā)生CHF的風(fēng)險(xiǎn)顯著增加[校正后比值比(odds ratio，OR)=5.163，95％可信區(qū)間（confidence interval，CI）=1.032-25.84，P=0.046);將心衰患者根據(jù)心功能等級(jí)分層后發(fā)現(xiàn)，r

14、s2306235 GG基因型頻率在心衰Ⅲ/Ⅳ級(jí)患者中顯著升高(OR=6.262，95％CI=1.32-29.62，P=0.0172)。但二元logistic回歸分析總體人群和分層研究后的結(jié)果，在經(jīng)年齡、性別、吸煙、飲酒、高血壓、糖尿病以及高脂血癥校正后均無顯著意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　1)CKIP-1 Pro21Ala多態(tài)性突變等位基因21Ala在中國(guó)健康人群中的頻率為10.0％，屬常見多態(tài)性。
　　2)