應用蛋白芯片篩選急性髓系白血病血清標志物的研究.pdf

1、目的：
　　近年來細胞遺傳學、分子生物學及治療靶點識別技術的發(fā)展,推動了靶向治療及分層治療水平的進步,明顯提高了急性髓系白血病(acutemyeloidleukemia,AML)臨床療效及總體生存率。目前細胞遺傳學和分子基因檢測已成為AML臨床分型的主要依據。美國國立癌癥綜合網(NCCN)和中國AML(非APL)診療指南均依據細胞遺傳學和分子生物學指標對AML進行危險度分級,分為預后良好,預后中等和預后不良組。但許多預后良好的患者

2、與臨床治療反應不相符,出現治療效果差,難緩解,緩解后易復發(fā)等情況。提示除已有的細胞遺傳學、分子生物學檢測指標及可能的檢測誤差等因素外,尚有許多更復雜的白血病預后因素尚未闡明。因此需要探索更全面、更準確的反映白血病患者預后的檢測指標及方法。
　　蛋白芯片(proteinmicroarray,或proteinchips)是高通量、高靈敏度、易于操作、實用性高的蛋白質研究工具。我們本課題選用RayBiotech可一次性檢測507種人類蛋

3、白表達水平的生物素標記抗體芯片,檢測目標蛋白包括血管生成因子、炎癥因子、生長因子、細胞因子、細胞粘附分子、可溶性受體、趨化因子和其他蛋白等。該芯片在鑒定關鍵發(fā)病因素、篩選生物標志物和藥物靶標等方面已顯示了較為廣泛的應用價值。故我們應用該芯片對具有不同細胞遺傳學和分子生物學標志的AML患者血清標本進行了檢測,期望篩選出臨床判斷AML預后價值的分子標志物,為后續(xù)制備用于臨床預測AML患者預后和指導個體化治療的蛋白芯片奠定基礎。
　　方

4、法：
　　1、收集從2011年08月至2013年01月在我科就診的AML初診患者(非APL)113例,根據細胞遺傳學標志、基因檢測和臨床治療效果進行分析,將其分為預后良好、預后中等和預后不良組。
　　2、蛋白芯片篩選AML血清標志物:應用可一次性檢測507種人類蛋白表達水平的生物素標記抗體芯片,對11例初診AML和5例健康對照組的血清標本進行檢測。
　　3、檢測AML血清中OPN的含量:應用ELISA法對18例AML(

5、9例預后良好組,9例預后不良組)和9例健康對照組的血清進行檢測。
　　4、采用AAH-BLM-1的數據分析軟件對檢測結果進行數據預分析,數據以x±S表示,并進行t檢驗。
　　結果：
　　1、根據初診AML患者的年齡、初診時白細胞總數(WBC)、細胞遺傳學和分子生物學標志以及臨床治療反應將接受了治療的71例患者進行分組,預后良好組10例,預后中等組27例,預后不良組34例。從預后良好組和預后不良組中篩選出11例AML患者

6、為后續(xù)試驗做準備。
　　2、11例AML與5例正常對照組比較,22個標志因子在AML中高表達(P<0.05)。包括生長因子:MFG-E8、Osteoactivin、Hepassocin、M-CSF、M-CSFR、InsulinR;白介素家族:IL-20、IL-3、IL-1F8/FIL1eta、IL-2Ralpha、IL-2Rbeta/CD122、IL-1R6/IL-1Rrp2;凋亡因子:Fas/CD95;粘附分子:ICAM-3/C

7、D50;趨化因子:6Ckine/CCL21;脂質運載蛋白:Lipocalin-1;新型跨膜蛋白:TMEFF1/Tomoregulin-1;基質金屬蛋白酶家族成員:MMP-3;轉化生長因子超家族成員:GFRalpha-4;腫瘤壞死因子受體超家族:TNF-alpha、GITR/TNFRF18、DR6/TNFRSF21。
　　3、6例預后不良組和5例預后良好組AML比較,11個標志因子在預后不良組中高表達(P<0.05)。包括生長因子:

8、VEGF-D、IGFBP1;基質金屬蛋白酶抑制劑:TIMP-2;內源性血管生成抑制劑:ES;蛋白水解酶:UPA;趨化因子:MIP-2、FGF-19;結合蛋白:LBP;黏附分子:L-selectin/CD62L;載脂蛋白:SAA;白介素17受體:IL-17RD。
　　4、ELISA法檢測AML和健康對照組血清標本,結果顯示AML預后不良組(FLT3/ITD陽性)血清OPN含量明顯高于預后良好組(AML1/ETO、NPM1陽性)和健康

9、對照組(P<0.05)。AML預后良好組(AML1/ETO、NPM1陽性)血清OPN含量明顯高于健康對照組(P<0.05)。
　　結論：
　　1、AML的預后和危險度分層與患者發(fā)病年齡、初診時WBC、細胞類型、細胞遺傳學和分子遺傳學標志以及臨床治療效果等均密切相關。
　　2、蛋白芯片檢測發(fā)現在AML細胞中有22個標志因子高表達,對AML細胞凋亡、增殖、分化及浸潤起到了重要作用,并與AML的發(fā)生、發(fā)展密切相關。
　

10、　3、與預后良好組比較,11個標志因子在AML預后不良組中高表達,其參與了AML的髓外浸潤、凝血和纖溶系統(tǒng)的調節(jié)、造血干細胞移植后的造血重建等過程。可作為構建AML預后判斷的新指標體系的依據,為預測AML預后、指導臨床個體化治療提供新的手段和方法。
　　4、伴有FLT3/ITD陽性的預后不良AML患者OPN表達明顯高于預后良好組,證實OPN在AML中是一個預后不良因素。也進一步驗證了AML血清標本的穩(wěn)定性和所做蛋白芯片檢測的可靠性