

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、引起豬腹瀉的病毒性病原主要有豬流行性腹瀉病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、豬傳染性胃腸炎病毒(Transmissible Gastroenteritis virus,TGEV)和輪狀病毒(Porcine rotavirus,PRV)),其中PEDV與TGEV同屬于冠狀病毒科,是最重要的兩種病原,引起發(fā)病豬嚴重腹瀉、嘔吐和脫水,各年齡的豬均都可感染,死亡率可高達100%。我國大部分省市地區(qū)都
2、有這兩種病發(fā)生的報道,臨床上常呈混合感染,或繼發(fā)感染,給養(yǎng)豬業(yè)造成了重大損失。目前實驗室診斷方法以病毒分離鑒定、PCR擴增技術為主。病毒分離周期長,且難度大;而PCR檢測存在一定比例的假陽性。
本研究利用生物素-親和素具有高親和性的特性,將PEDV和TGEV IgG抗體分別進行生物素標記,并以商品化PEDV S蛋白單克隆抗體和TGEV S蛋白單克隆抗體作為捕獲抗體,分別建立了檢測PEDV、TGEV的生物素-親和素系統(tǒng)雙抗體夾心
3、ELISA檢測方法,并初步建立單一病原檢測的Luminex體系,為后續(xù)豬腹瀉病原的多重檢測方法研究奠定基礎。
1.PEDV雙抗體夾心ELISA檢測方法的建立
以體外表達的PEDV S蛋白作為抗原,商品化抗PEDV S蛋白單克隆抗體作為捕獲抗體,生物素標記的抗PEDV IgG作為檢測抗體,建立了PEDV生物素-親和素系統(tǒng)雙抗夾心ELISA方法。結果表明,該方法可以檢測到PEDV S蛋白的最低檢測限量為20ng/ul,且
4、穩(wěn)定性和特異性較好。利用該方法對采集的25份臨床豬腹瀉樣品進行檢測,結果檢出3份PEDV陽性樣品,與RT-PCR檢測方法的符合率為100%。
2.TGEV雙抗體夾心ELISA檢測方法的建立
以商品化的TGEV S蛋白單克隆抗體作為捕獲抗體,純化的TGEV細胞毒作為抗原,生物素標記的抗TGEV IgG作為檢測抗體,建立了檢測TGEV的生物素-親和素系統(tǒng)雙抗夾心ELISA方法。結果表明,該方法可檢測TGEV細胞毒的最低濃
5、度為17.5ng/μl,敏感性較好。此外,利用該方法對采集的25份臨床豬腹瀉樣品進行檢測,結果檢出1份TGEV陽性樣品,與RT-PCR檢測方法的符合率為100%。
3.PEDV、TGEV Luminex方法初步建立
應用xMAP液相芯片技術原理,以建立的雙抗夾心反應條件為參照,用偶聯(lián)微球的商品化單克隆抗體和生物素化IgG抗體,初步建立了捕獲PEDV、TGEV病原的LiquiChip液相蛋白芯片檢測方法。
本
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 三種豬病毒性腹瀉病原檢測方法和PEDV間接ELISA方法的建立與初步應用.pdf
- 豬病毒性腹瀉病原相關蛋白在植物系統(tǒng)中的表達.pdf
- 牛病毒性腹瀉病毒抗體間接ELISA檢測方法的建立及臨床血清學調查.pdf
- 豬病毒性腹瀉PCR檢測方法建立與流行病學調查.pdf
- 豬主要病毒性疾病病原的分子檢測技術研究.pdf
- 病毒性軟化病病原(桐鄉(xiāng)株)的分離鑒定及ELISA檢測方法的初步應用.pdf
- 豬冠狀病毒性腹瀉RT-PCR檢測及豬傳染性胃腸炎病毒分離鑒定.pdf
- 牛病毒性腹瀉病毒NS3基因片段的原核表達及間接ELISA檢測方法的初步建立.pdf
- 豬流行性腹瀉病毒抗體間接ELISA檢測方法的建立.pdf
- 豬病毒性腹瀉多重RT-PCR診斷方法的建立和應用及豬輪狀病毒的分離.pdf
- 牛病毒性腹瀉病毒RT-PCR檢測及分型研究.pdf
- 鴨病毒性肝炎病毒的分離鑒定及ELISA檢測抗體方法的建立.pdf
- 豬流行性腹瀉病毒抗體間接ELISA檢測方法的建立及應用.pdf
- 新生仔豬病毒性腹瀉
- 豬源牛病毒性腹瀉病毒RT-PCR檢測方法的建立及表達BVDV保護性抗原重組豬痘病毒的構建.pdf
- 建立檢測病毒性出血熱的Luminex液相芯片技術.pdf
- 豬腹瀉病原多重PCR檢測方法的建立及主要病毒進化分析.pdf
- 牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)抗原捕獲ELISA檢測試劑盒的標準化研究.pdf
- 鴨病毒性腸炎McAb-ELISA檢測方法的建立與應用.pdf
- 河北省嬰幼兒病毒性腹瀉的病原學研究.pdf
評論
0/150
提交評論