雞病毒性關(guān)節(jié)炎病毒增殖特性與間接ELISA抗體檢測方法的建立研究.pdf

1、本研究對雞病毒性關(guān)節(jié)炎病毒(ARV)雞胚增殖特性進(jìn)行了探索，建立了檢測該病抗體的間接ELISA方法，為開展該病的病原分離鑒定、疫病診斷和流行病學(xué)調(diào)查奠定了基礎(chǔ)。 種毒經(jīng)雞胚增殖后收集尿囊膜毒、尿囊液毒、卵黃液毒和胚體毒，再分別接種卵黃囊，以胚體毒致死雞胚的時間最短，尿囊膜毒致死雞胚的時間最長；病毒經(jīng)氯仿處理后接種卵黃囊，雞胚死亡時間比未經(jīng)氯仿處理的對照組推遲15h，說明病毒對氯仿具有一定的敏感性；病毒經(jīng)卵黃囊、尿囊腔和尿囊膜3種

2、途徑接種雞胚，最早死亡時間分別為51h、53h和56h。將ARV雞胚毒分別用50％飽和(NH<,4>)SO4沉淀、10％PEG6000沉淀和差速離心純化，測得蛋白含量分別為8.699 mg/ml、17.684 mg/ml和5.35 mg/ml，其中，前2種方法雜蛋白含量相對較高。差速離心的樣品，電鏡下觀察到了大量規(guī)則排列的病毒粒子，無囊膜，有雙層衣殼，直徑約為75nm。以差速離心純化的病毒作為包被抗原，建立了檢測ARV抗體的間接ELIS

3、A方法，確定了抗原最佳包被濃度為252μg/ml，1％BSA 封閉1.5h，血清最佳工作濃度為1：160，37℃反應(yīng)1.5h，酶標(biāo)兔抗雞的稀釋度為1：5000，37℃作用1h，底物37℃作用15min。特異性試驗結(jié)果表明，NDV、IBDV、支原體的陽性血清OD值均小于ARV陰陽性血清的臨界值，與抗原沒有交叉反應(yīng)；未加 ARV 抗原阻斷的對照ARV陽性血清的OD值大于抗原阻斷的陽性血清的OD值，而加ARV抗原阻斷的各稀釋度的陰性血清OD值