豬流行性腹瀉病毒間接ELISA檢測方法的優(yōu)化與疫苗免疫試驗(yàn)研究.pdf

1、豬流行性腹瀉病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是一種可引起受感染豬群水樣腹瀉、嘔吐和脫水等癥狀的高度接觸性急性腸道傳染病病原。因該病分布廣、發(fā)病急且各年齡段、各品種豬均可感染發(fā)病,特別是對新生仔豬造成高死亡率,給養(yǎng)豬業(yè)帶來了重大的經(jīng)濟(jì)損失。本研究通過優(yōu)化PEDV N蛋白抗體的ELISA的檢測方法,對當(dāng)前商品化的疫苗和自家苗的免疫效果進(jìn)行評估,以期為豬場選出一種免疫效果較好的疫苗和免疫方式。<

2、br>　　本研究將純化的原核表達(dá)N蛋白作為抗原包被酶標(biāo)板,通過優(yōu)化反應(yīng)條件,最終確定ELISA反應(yīng)條件為:重組N蛋白做20倍稀釋,包被條件為37℃2h;封閉條件為5％脫脂奶粉4℃封閉過夜;待檢血清做40倍稀釋,與重組蛋白反應(yīng)條件為37℃1h;山羊抗豬IgG二抗做8000倍稀釋,與待檢血清反應(yīng)條件為37℃1h,TMB底物顯色條件為室溫10min,最后于酶標(biāo)儀上讀取 OD450值,當(dāng) OD450值大于等于0.161時判定為陽性,小于0.16

3、1則判為陰性。
　　鑒于豬流行性腹瀉病毒嚴(yán)重的危害性,且國內(nèi)常用的疫苗免疫效果不一。本研究隨機(jī)選取廣西某國有規(guī)?；i場30日齡仔豬40頭,分為8組,每組5頭,將3種市售疫苗、兩種自場苗、一株自制細(xì)胞苗,按各自疫苗免疫程序分別免疫各組,并在免疫后28天進(jìn)行攻毒實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示各組疫苗免疫效果普遍不理想,試驗(yàn)豬只抗體水平普遍不高。其中市售的二聯(lián)滅活疫苗相比于其他疫苗具有較好的免疫保護(hù)效果,其次是自家苗的組合免疫方法也有較好的免疫效果。實(shí)

4、驗(yàn)結(jié)果顯示,多種免疫方法交叉重復(fù)使用(例如:口服+后海穴注射),能提供相對較好的免疫效果。
　　本研究利用自己研制的ELISA抗體檢測試劑盒,進(jìn)行豬只體內(nèi)PEDV抗體水平消長規(guī)律研究,結(jié)果顯示,免疫自家滅活苗的母豬能產(chǎn)生較高的抗體水平,母豬的整體抗體水平在產(chǎn)前7天時達(dá)到最高,之后有所下降。而仔豬的PEDV母源抗體水平在7日齡時最高,之后成下降趨勢,21日齡時接近最低水平。對比母豬和仔豬抗體水平發(fā)現(xiàn),無論母豬抗體水平高低,仔豬的抗體