藜蘆人參配伍體內(nèi)外成分變化與毒性的關(guān)聯(lián)性研究.pdf

1、目的:中藥“十八反”是中藥配伍理論的重要組成部分,是中醫(yī)長期臨床實(shí)踐的經(jīng)驗(yàn)所得,在指導(dǎo)中藥合理配伍使用,保證患者用藥安全中一直發(fā)揮著重要作用。人參藜蘆配伍是其中最具代表性的相反藥對(duì),以往的研究大都集中在對(duì)這種配伍增毒現(xiàn)象的確證上,而對(duì)產(chǎn)生這種現(xiàn)象的機(jī)理尚不十分清楚,特別是體內(nèi)外毒性成分變化是否與配伍增毒密切相關(guān)尚未深入研究。因此,本研究分別從體外和體內(nèi)兩個(gè)層面研究人參藜蘆配伍后成分變化,并與動(dòng)物毒性變化進(jìn)行關(guān)聯(lián),發(fā)現(xiàn)了一些人參藜蘆配伍增

2、毒的物質(zhì)基礎(chǔ)和體內(nèi)過程的證據(jù),對(duì)于科學(xué)認(rèn)識(shí)中藥“十八反”在中藥復(fù)方中的配伍禁忌的規(guī)律,指導(dǎo)臨床安全合理使用同類藥物提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法:本研究采用UPLC-Q/TOF-MS技術(shù),以藜蘆的化學(xué)指紋圖譜及其毒性成分辨識(shí)為切入點(diǎn),從體外和體內(nèi)兩個(gè)層面研究人參藜蘆配伍后成分變化,并與動(dòng)物毒性變化進(jìn)行關(guān)聯(lián),建立人參與藜蘆配伍毒性評(píng)價(jià)體系,測定了人參與藜蘆的半數(shù)致死量或最大耐受量,以及1:1配比時(shí)動(dòng)物毒性實(shí)驗(yàn)以及合煎、合并液毒性差異。完成

3、了人參藜蘆配伍反藥組合基于均勻設(shè)計(jì)和不同配比兩種模型的急性毒性評(píng)價(jià)研究,從中發(fā)現(xiàn)了反與不反的配伍規(guī)律以及比較了兩種模型在中藥毒性評(píng)價(jià)中的優(yōu)略。采用均勻設(shè)計(jì)對(duì)人參反藜蘆各配伍藥對(duì)進(jìn)行了動(dòng)物毒性實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)了某些特定比例下存在相反作用,并以此為線索進(jìn)行了深入研究。在體內(nèi)研究層面,首先確定了藜蘆總生物堿經(jīng)CYP酶代謝的亞型,并考察了經(jīng)人參預(yù)處理的大鼠代謝藜蘆總生物堿中主要成分的血藥濃度差異,以期尋找人參藜蘆配伍增毒的基于CYP酶的體內(nèi)代謝證據(jù)。

4、
　　結(jié)果:分別考察兩味單藥的急性毒性,藜蘆的半數(shù)致死量為2.566g/kg,人參的最大耐受量大于80g/kg。兩藥1:1配伍時(shí),合并液死亡率為35％,合煎液死亡率50%。合并液與合煎液毒性在藜蘆與人參1:1配比時(shí)并未明顯差異。設(shè)計(jì)2因素7水平均勻設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)藜蘆人參在1:2.63配比時(shí)合煎液的死亡率為70%,合并液死亡率為10%。在該配比的情況下有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。考察其物質(zhì)基礎(chǔ)的變化情況,在合并液與合煎液的物質(zhì)成分研究的基礎(chǔ)上,增加合并

5、后再煎液組,結(jié)果顯示芥芬胺可能是合煎過程中化學(xué)反導(dǎo)致其成分發(fā)生變化;計(jì)米亭堿、3-當(dāng)歸酰棋盤花胺和藜蘆堿可能是在合煎過程中皂苷類成分增大了其溶出率。
　　固定藜蘆劑量為2.566g/kg,將人參與藜蘆不同配比(10:1～1:10)進(jìn)行毒性實(shí)驗(yàn),將人參劑量從0.2566g/kg到25.66g/kg逐步提高,小鼠死亡率呈下降趨勢。人參與藜蘆配伍時(shí)人參比例較小時(shí)毒性增大,物質(zhì)成分分析顯示藜蘆毒性生物堿的溶出增加,存在相反增毒現(xiàn)象;隨著人

6、參比例增加毒性下降,物質(zhì)成分分析顯示生物堿含量呈下降趨勢。提示配伍禁忌不是絕對(duì)的,與二者用量有密切關(guān)系,人參用量加時(shí),可能還會(huì)有減毒作用?？疾炝思逯?0min、60min、90min、120min四個(gè)時(shí)間點(diǎn)生物堿的溶出情況,結(jié)果顯示藜蘆新堿的含量上升,介芬胺的兩種衍生物的含量呈下降趨勢。
　　首先提取藜蘆中的總生物堿,并對(duì)其含量進(jìn)行測定,介芬胺為21.82%,藜蘆胺為24.60%?？疾?種參與藥物代謝的細(xì)胞色素P450亞酶,結(jié)果顯

7、示CYP1A2亞酶抑制劑的加入能明顯抑制多種生物堿的代謝,而CYP2B1,CYP2D1,CYP2E1,CYP3A4抑制劑對(duì)生物堿的代謝抑制不明顯,提示CYP1A2對(duì)藜蘆總生物堿的代謝貢獻(xiàn)率最大,是參與其代謝的主要亞酶。
　　大鼠按9倍臨床最高劑量連續(xù)7天口服給藥人參后,一次性腹腔注射臨床最高劑量4.5倍總生物堿,通過測定生物堿的藥代動(dòng)力學(xué)變化,比較人參組與空白組之間藜蘆總生物堿代謝差異,結(jié)果顯示人參預(yù)處理組介芬胺和藜蘆胺的AUC均