丁苯酞預處理對腦缺血再灌注大鼠皮質神經元超微結構和白介素-1β的影響.pdf

1、缺血性腦卒中是目前高發(fā)病、高致殘、高致死率,嚴重危害人類的健康的疾病。腦缺血的發(fā)生會使神經細胞大量壞死并凋亡,尤其是神經細胞對缺血性的損害異常敏感,可引發(fā)嚴重甚至不可逆性的神經缺失癥狀。所以,提高神經細胞對缺血性損害的耐受力,調動機體的內源性保護機制,使神經細胞在受到較嚴重的缺血打擊下能保持膜功能的完整性,減少損傷,確保這些神經細胞在復流后仍具有正常生理功能,是治療缺血性腦血管病的一個重要內容。目前全球都在高度重視對其發(fā)生機制及應對辦法

2、的研究?，F有研究表明,應用藥物模擬或誘導一些物質如腺苷、HSP等的表達,可使神經細胞對缺血性損傷產生耐受力。消旋-3-正丁基苯酞(簡稱NBP)是治療急性缺血腦卒中的一類化學藥物,對急性缺血性腦卒中患者的中樞神經功能的損傷有改善作用,可促進神經功能的恢復。最近國內外有多篇關于丁苯酞腦保護的資料多集中在對缺血性腦血管病的治療上,但是,丁苯酞預處理能否提高神經細胞對腦缺血的耐受性仍處于初期研究階段。目前對于丁苯酞預處理在缺血再灌注損傷中的作用

3、機制中,細胞凋亡途徑中的線粒體途徑、死亡受體介導途徑研究較多,包括缺血性神經元凋亡通路中細胞色素C的釋放、線粒體釋放的凋亡蛋白-Smac/DIABLO、Caspase家族3、8、以及HSP-70等,均發(fā)現丁苯酞的神經保護作用。炎性反應是中樞神經系統急、慢性病變的主要損傷機制之一,異常激活的腦膠質細胞參與這一重要的疾病病理進程。白細胞介素-1(interleukin-1, IL-1)系統分子主要包括白介素-1α和白介素-1β,廣泛分布于中

4、樞神經系統。應激引發(fā)的白介素-1增加不僅表現在外周組織如血液、脾臟,在中樞神經系統的一些腦區(qū)如大腦皮層、下丘腦、海馬也有表達。白介素-1β是一種炎癥介質,其具有多向性生物功能,能夠有效調節(jié)炎癥和免疫反應。多項研究表明,在缺血損傷后白介素-1β的過度表達會加重大腦皮質神經元的損害。
　　目的:
　　觀察丁苯酞預處理后大鼠大腦皮質梗死范圍、神經功能缺損、電鏡下大腦皮質超微結構變化,及白介素-1β含量的變化,以進一步探討預防性應用

5、丁苯酞對大腦皮質神經元的保護作用,并能否與他汀、阿司匹林一樣,作為腦血管病高危因素患者的一級預防用藥,從而為預防腦血管病發(fā)生提供新的思路和方法。
　　方法:
　　選取160只雄性SD大鼠,分為假手術組(Sham組)、缺血再灌注組(IR組)、NBP低劑量預處理組(NBP低劑量組)、NBP中劑量預處理組(NBP中劑量組)和 NBP高劑量預處理組(NBP高劑量組),每組32只,NBP預處理組于大腦中動脈堵塞前1周起給予大鼠每日一次

6、丁苯酞灌胃,IR組及Sham組給予生理鹽水灌胃。采用Longa改良線栓法制備大鼠右側大腦中動脈缺血再灌注模型,缺血2小時,再灌注24小時。大鼠清醒后進行神經功能缺損評分,TTC檢測梗死體積,檢測大腦皮質白介素-1β指標,觀察皮質神經元、神經膠質細胞、炎性細胞的超微結構改變。
　　結果:
　　1、各組大鼠神經功能缺損評分比較
　　IR組、NBP預處理低劑量、中劑量、高劑量四組間比較,NBP組均較IR組評分減少,NBP組間

7、兩兩比較結果顯示無明顯差異(P>0.05),但NBP高劑量組和NBP中劑量組與IR組比較均有顯著性意義(P<0.01)。
　　2、TTC檢測梗死體積比較結果
　　用TTC法檢測IR組、NBP低劑量、NBP中劑量和NBP高劑量組梗死體積,NBP各組較IR組比較梗死體積均縮小,有顯著性差異(P<0.01);NBP高劑量組較中、低劑量組梗死體積縮小,比較有顯著性差異(P<0.01)。
　　3、HE染色結果
　　HE染色

8、可見:Sham組:正常,未見明顯神經元變性、壞死等病理改變。NBP組出現不同程度的細胞形態(tài)及結構的異常,胞體和胞核固縮甚至核破裂,但相對于IR組數量減少,程度較弱,且NBP高劑量組較中、低劑量組的神經元損傷更輕微。
　　4、透射電鏡觀察各組大鼠腦皮質神經元、神經膠質細胞、炎性細胞的超微結構結果
　　Sham組:正常的細胞超微結構表現。IR組:大腦皮質神經組織結構破壞嚴重,炎性細胞浸潤。NBP各組較IR組比較,大腦皮質神經元結

9、構壞死、溶解程度及線粒體損傷較輕,神經膠質細胞損傷有所減輕。
　　5、各組白介素-1β含量數值比較
　　與 Sham組比較,余各組大腦皮質白介素-1β含量均明顯增高(P<0.01),NBP低劑量組白介素-1β含量較IR組減少(P<0.05),NBP中、高劑量組白介素-1β含量較IR組減少(P<0.01),有顯著意義。NBP高劑量組與中、低劑量組兩兩比較白介素-1β含量均有顯著性差異((P<0.01)。
　　結論:

10、>　　1、NBP預處理組的大鼠大腦皮質梗死區(qū),較Sham組及IR組均明顯縮小。提示丁苯酞預處理可減小腦缺血后腦梗死體積。
　　2、NBP預處理組較 IR組神經功能缺損評分明顯減少,光鏡及電鏡下可顯示大腦皮質神經元破壞程度較小,保留部分線粒體,神經元損害較輕。提示丁苯酞預處理對神經元有預防性保護作用。
　　3、電鏡下提示,在Sham組未見白細胞浸潤,但IR組及NBP預處理組均明顯增多,但NBP各組的炎性細胞浸潤較IR組明顯減少