氯化鋰保護大鼠視網膜神經細胞損傷分子機制的初步探討.pdf

1、中山大學碩士學位論文氯化鋰保護大鼠視網膜神經細胞損傷分子機制的初步探討姓名：李凡申請學位級別：碩士專業(yè)：眼科學指導教師：余克明20080526氯化鋰保護大鼠視網膜神經細胞損傷分子機制的初步探討 中文摘要1 ．原代培養(yǎng)S D 乳鼠視網膜神經細胞，M A P 2 免疫熒光法鑒定神經細胞純度。0 ．5 m M ，1 ．0 m M ，3 ．0 m M 氯化鋰( 對照組不加氯化鋰) 處理，1 2 h 后換至含O ．5％F B S 的培養(yǎng)基，進行缺

2、血處理，3 6 h 后倒置顯微鏡下進行拍照，比較不同組問突起長度的差異。2 ．原代培養(yǎng)視網膜神經細胞，缺血處理4 0 h 后提取細胞總D N A ，電泳檢測D N A的完整性。3 ．原代培養(yǎng)S D 乳鼠視網膜神經細胞，R T - P C R 檢測氯化鋰對M r e I l 、K u 、L i g a s eI V 表達的影響。4 ．R e a lt i m eR T - P C R 進一步檢測氯化鋰對原代培養(yǎng)視網膜神經細胞L i g a

3、 s eI V ，轉錄因子C R E B 和C T C F 表達的影響。5 ．通過質粒轉染，利用流式細胞儀檢測G F P 陽性細胞的比例，即視網膜神經細胞D N A 非同源末端連接( N H E J ) 的修復效率。6 ．動物實驗：實驗組大鼠每日皮一卜注射I ．5 m E q ／K g 氯化鋰，對照組注射等量P B S ，采用前房灌注法制造急性高眼壓缺血再灌注損傷大鼠模型，術后l 大、l 周、2 周取材，制作石蠟切片，進行常規(guī)H E 染

4、色、D A P I 染色和原位凋亡檢測，體內觀察氯化鋰對視網膜神經細胞的保護作用。結果：1 ．M A P 2 免疫熒光鑒定，所培養(yǎng)視網膜細胞中，神經細胞占8 0 ％。缺血處理3 6 h后，對照組神經細胞突起較短( 2 2 ．0 7 士9 ．9 0 9 m ) ，加入不同濃度氯化鋰進行處理的神經細胞突起較長，較對照組長度差異均有統(tǒng)計學意義；尤其加入1 ．0 m M ( 4 8 ．7 1 + 1 5 ．9 3 1 a m ) 和3 ．0 m

5、 M ( 5 2 ．1 3 + 1 6 ．8 8 9 m ) 氯化鋰組，細胞的突起較對照組明顯增長、交織呈網狀。2 ．D N A 電泳結果顯示氯化鋰促進神經細胞D N A 的修復，染色體D N A 更完整，發(fā)生的斷裂較對照組明顯減少。濃度1 ．0 m M 氯化鋰為最佳。3 ．R T - P C R 檢測表明，加入1 ．0 m M 氯化鋰處理的神經細胞中，L i g a s eI Vm R N A 的表達，較對照組有明顯增加，而K u 和