四種外排泵基因表達(dá)在多重耐藥銅綠假單胞菌中的分布及其作用.pdf

1、目的：探討外排泵MexAB-OprM、MexXY-OprM超表達(dá)和MexCD-OprJ、MexEF-OprN表達(dá)在我院多重耐藥（multi-drug resistance MDR）銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa，Pa）中的分布及其作用，相關(guān)調(diào)控基因的突變情況。 方法：收集2008年我院臨床分離非重復(fù)銅綠假單胞菌株58株，其中多重耐藥菌株（multi-drug resistance，MDR）40株，非多

2、重耐藥菌株（None multi-drug resistance，NMDR）18株，野生菌株1株，質(zhì)控菌株1株.以外排泵抑制劑（Efflux pumps inhibitor， EPI；苯丙氨酸-精氨酸-β萘酰胺，Phe-Arg-β-naph thylamide，PAβN）及4種藥敏紙片進(jìn)行基因表型初步篩選，采用RT-PCR定性，Real time-PCR半定量分析基因超表達(dá)，明確在耐藥菌株中的分布；通過對(duì)照研究分析Pα外排泵基因表達(dá)在多

3、重耐藥中的作用；常規(guī)PCR擴(kuò)增調(diào)控基因并測(cè)序，了解其調(diào)控基因突變情況。 結(jié)果：基因表型篩選MRD組菌株MexAB-OprM陽性率45.0％（18/40），MexCD-OprJ陽性率30.0％（12/40），MexEF-OprN陽性率42.5％（17/40），MexXY-OprM陽性率12.5％（5/40）；以mexA、C、E、X基因代表各自外排泵系統(tǒng)行PCR擴(kuò)增，RT-PCR示mexA和mexX表達(dá)陽性率分別為100％（58/5

4、8）和22.5％（9/40），Real time-PCR半定量分析超表達(dá)菌株（PA mexA，X2-CT/ rpsL的2-CT/野生菌株mexA，X2-C/TrpsL的2-CT>1）陽性率分別為55.0％（22/40）和22.5％（9/40），RT-PCR mexC陽性率22.5％（9/40），mexE陽性率45.0％（18/40）。基因擴(kuò)增結(jié)果與外排表型符合率（基因/表型）MexAB-OprM100％（18/18）， MexCD-Op

5、rJ55.6％（5/9），MexEF-OprN64.7％（11/17），MexXY-OprM40.0％（2/5）；非多重耐藥組中，mex A與mexXReal-timePCR超表達(dá)陽性率均為0.0％（0/18）。mexC和mexE RT-PCR表達(dá)陽性率分別為11.1％（2/18）、38.9％（7/18）。多重耐藥組與非多重耐藥組相比，mexA與mexX表達(dá)差異有顯著性（P<0.001，P=0.045），而mexC和mexE表達(dá)差異無明

6、顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.306，P=0.778）。調(diào)控基因測(cè)序結(jié)果與GeneBank中已知的mexR，nfxB，mexZ對(duì)比，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，超表達(dá)mexA菌株P(guān)α20出現(xiàn)基因突變，164 GTG→GAG，126氨基酸Val→Glu替代，Pα40未發(fā)現(xiàn)突變位點(diǎn)；超表達(dá)mexX菌株P(guān)α34出現(xiàn)基因突變，164 GCG→GAG，氨基酸55 Ala→Glu，表達(dá)mexC菌株P(guān)α2、Pα40 nfxB基因?yàn)橥x突變，無氨基酸替代。 結(jié)論：（1）