采用PCR聯(lián)合變性高效液相色譜技術(shù)快速檢測(cè)和鑒定臨床可疑念珠菌感染標(biāo)本.pdf

1、廣州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文采用PCR聯(lián)合變性高效液相色譜技術(shù)快速檢測(cè)和鑒定臨床可疑念珠菌感染標(biāo)本姓名：陳翠珊申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：皮膚性病學(xué)指導(dǎo)教師：王建琴20090520廣州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文 采用P C R 變性高效液相色譜技術(shù)快速檢測(cè)和鑒定臨床可疑念珠菌感染標(biāo)本U s i n gP C R ／D e n a t u r i n g h i g h ’·。p e r f o r m a n c el i q u i dc h

2、 r o m a t o g r a p h yf o rr a p i dd e t e c t i o na n di d e n t i f i c a t i o n o fc a n d i d as p e c i e s o fc l i n i c a l s u s p e c t e ds a m p l e sC a n d i d a t e ：C h e n C u i s h a nS u p e r v i

3、 s o r ：W a n g J i a n q i nA B S T R A C To b j e c t i v e T oe x p l o r et h ec l i n i c a l a p p l i c a t i o no fP C R ／D e n a t u r i n gh i g h —p e r f o r m a n c el i q u i d c h r o m a t o g r a p h y (

4、 P C R ／D H P L C ) i nt h e d e t e c t i o na n d i d e n t i f i c a t i o n o f c a n d i d as p e c i e s o f c l i n i c a ls u s p e c t e d s a m p l e s ．M e t h o d S i x t y —t h r e eh u m o r a l c l i n i c

5、 a l s a m p l e s w e r ei n c l u d e di nt h i s s t u d y ．P o l y m e r a s eC h a i n R e a c t i o n ( P C R ) w a su s e dt o a m p l i f yt h ei n t e m a lt r a n s c r i b e ds p a c e r ( I T S ) r e g i o n

6、o fr i b o s o m a l D N A ( rD N A ) f r o mt h ea b o v e - m e n t i o n e d s a m p l e s ，u s i n g f u n g a l u n i v e r s a lp r i m e r s ．P C R p r o d u c t sw e r ev e r i f i e db ye l e c t r o t h o r e s

7、 i s ．I f p o s i t i v e ，i tw a st h e na n a l y z e db yD H P L C ．T h e s a m p l e s w e r ed e t e c t e db y t r a d i t i o n a lc u l t u r ea sc o n t r a s t a tt h es a m e t i m e ．F o rv e r i f y i n g t

8、h e v e r a c i t y o ft h i s m e t h o d ，t h ea m p l i f i e d D N A w a ss e q u e n c e d ．T h ed i f f e r e n c e o fp o s i t i v e r a t e s o fP C R ／D H P L Ca n dc u l t u r e m e t h o d sw a se v a l u a t

9、 e d b yf i s h e r ’Se x a c t t e s t ．R e s u l t s T h e w h o l e p r o c e s so f P C P U D H P L C t o o ka b o u t 6 ．5 h ，w h i l ew h i c h o f c u l t u r em e t h o d s t o o k2 d a y sl o n g ．1 5 o u t o f

10、6 3s a m p l e s ( 2 3 ．8 1 ％) w e r e p o s i t i v eb yP C R ／D H P L C ，a m o n g w h i c h11 s a m p l e sw e r eC a n d i d a a l b i c a n s ，2s a m p l e sw e r e C a n d i d a t r o p i c a l i s ，2s a m p l e s

11、w e r e C a n d i d a g l a b r a t a ，S i d ep e a k w a s o b s e r v e di n2 s a m p l e s o f C a n d i d a a l b i c a n s ．13o u to f 6 3 s a m p l e s ( 2 0 ．6 3 ％) w e r ep o s i t i v eb yc u l t u r e ，a m o n

12、gw h i c h 10s a m p l e sw e r eC a n d i d a a l b i c a n s ，2s a m p l e s w e r eC a n d i d a t r o p i c a l i s ，1 s a m p l e s w e r eC a n d i d ag l a b r a t a ．．A c o r r d i n gt o t h e a n a l y s i sw i

13、 t hS P S S 13 ．0 s o f t w a r e ，t h e r ew a sn os i g n i f i c a n t s t a t i s t i c a ld i f f e r e n c ei n t h ep o s i t i v er a t e s o ff u n g i b e t w e e nt h eP C R ／D H P L Ca n dc u l t u r em e t h