條斑紫菜葉狀配子體營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和生殖細(xì)胞的蛋白質(zhì)組分析比較.pdf

1、條斑紫菜是我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)栽培海藻，圍繞其育種育苗以及相關(guān)生理生化等方面的研究已經(jīng)展開(kāi)并積累了一定的研究基礎(chǔ)。
　　性別分化是發(fā)育生物學(xué)中重要的科學(xué)問(wèn)題之一，恰當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)材料的選擇是促進(jìn)此研究取得進(jìn)展的重要因素。條斑紫菜因其葉狀配子體由單層細(xì)胞組成，雌雄同株，大部分精子囊細(xì)胞分布在其邊緣，從營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞向性細(xì)胞的分化過(guò)程相當(dāng)于高等植物減數(shù)分裂后子細(xì)胞的后續(xù)發(fā)育過(guò)程，所以是研究營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞向性細(xì)胞分化發(fā)育過(guò)程這一重要科學(xué)問(wèn)題的理想材料。

2、　　本實(shí)驗(yàn)中，取新鮮紫菜，放在與其生長(zhǎng)條件溫度相同的大量的水體中以維持其良好的生理活性并立即利用刀片分別收集條斑紫菜的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和精子囊細(xì)胞，切下來(lái)的細(xì)胞迅速在顯微鏡下觀察，營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞是獨(dú)立的大細(xì)胞，每個(gè)精子囊細(xì)胞分成2-8個(gè)不等的部分，兩種材料迅速用液氮冷凍之后分別收集約2g，于-80℃凍存。綜合比較飽和硫酸銨沉淀法、三氯乙酸/丙酮沉淀法、酚提取法等蛋白質(zhì)提取方法，發(fā)現(xiàn)酚提取方法能夠有效地去除蛋白質(zhì)中的多糖、色素等雜質(zhì)，因此確定最適合條斑

3、紫菜蛋白提取的方法為酚提取法。并且酚提取方法中使用的試劑不會(huì)對(duì)后續(xù)質(zhì)譜鑒定實(shí)驗(yàn)造成影響，利用改良酚法提取兩種材料的可溶性總蛋白之后，雙向電泳檢測(cè)提取的蛋白良好，再利用ITRAQ標(biāo)記技術(shù)對(duì)兩種材料的蛋白質(zhì)干粉進(jìn)行差異蛋白的分析，發(fā)現(xiàn)這兩種材料中的差異蛋白共有549種，篩選之后共獲得具有穩(wěn)定差異的蛋白質(zhì)101種，精子囊細(xì)胞相對(duì)于營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞有88種蛋白質(zhì)的含量表現(xiàn)為下調(diào)，13種蛋白質(zhì)的含量表現(xiàn)為上調(diào)。這101種蛋白質(zhì)中，與蛋白質(zhì)翻譯有關(guān)的蛋白質(zhì)