利用Cre-loxp系統(tǒng)定點(diǎn)刪除轉(zhuǎn)基因水稻胚乳中外源基因的初步研究.pdf

1、水稻作為主要的糧食之一，其轉(zhuǎn)基因食品安全性一直是人們比較關(guān)注的問題，水稻食用部位精米即胚乳，如果能在胚乳中定位刪除外源基因，那么就可徹底解決轉(zhuǎn)基因水稻的食品安全性的問題。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟诶肅re/loxp定點(diǎn)刪除系統(tǒng)，在轉(zhuǎn)基因水稻胚乳中定位刪除外源基因，構(gòu)建一個(gè)高效的轉(zhuǎn)基因水稻胚乳外源基因刪除系統(tǒng)。為實(shí)現(xiàn)這一目的，以水稻胚乳特異性表達(dá)啟動(dòng)子Gtl為重組酶Cre的表達(dá)調(diào)控因子，以報(bào)告基因gus的表達(dá)設(shè)計(jì)了兩條路線來驗(yàn)證此研究方法的可行性。

2、路線一為外源基因在轉(zhuǎn)基因水稻的根、莖、葉片中未被刪除時(shí)，這些組織不表達(dá)gus基因，而在胚乳中外源基因被刪除時(shí)表達(dá)gus基因，本研究構(gòu)建了相應(yīng)的載體pCAIMGtlCGUS，通過根農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化獲得了202個(gè)克隆的轉(zhuǎn)基因水稻植株，存活146個(gè)克隆，分子檢測(cè)表明大部分克隆中外源基因已整合入水稻基因組，gus基因表達(dá)的組織化學(xué)檢測(cè)根、莖、葉、胚、胚乳都沒有染上顏色，RT-PCR分子檢測(cè)正在進(jìn)行。路線二，在根、莖、葉等組織中外源基因不被刪除時(shí)表達(dá)g