mGFP4和Cre-loxP系統(tǒng)在轉(zhuǎn)基因水稻中的應(yīng)用.pdf

1、隨著植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)的發(fā)展,建立實用有效的無選擇標(biāo)記遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng),培育不帶選擇標(biāo)記基因的轉(zhuǎn)基因作物已成為國際上植物基因工程的一個發(fā)展方向.為優(yōu)化該實驗室建立的雙T-DNA共轉(zhuǎn)化系統(tǒng)去除選擇標(biāo)記基因的技術(shù)體系和建立新的水稻去除標(biāo)記基因體系,該文研究了GFP和GFP-Hyg融合蛋白在水稻中的表達,初步探討了Cre/loxP系統(tǒng)在轉(zhuǎn)基因水稻中的刪除效率.通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法獲得了4種攜帶mgfp4基因表達載體的水稻再生植株522個克隆,通過PCR、

2、Southern blot及后代遺傳分析,證明大部分外源基因以較低拷貝數(shù)整合進水稻基因組中;通過熒光觀察及RT-PCR檢測,表明了mGFP4在水稻中能表達,但其發(fā)出的綠色熒光檢測效果不甚理想;通過PCR分析,推測在低溫誘導(dǎo)啟動子(wcs)控制下,Cre基因可表達并實現(xiàn)外源基因的刪除.此外,該研究還建立了一種用NaOH處理法快速穩(wěn)定制備PCR模板的方法,該方法與常規(guī)CTAB法相比具有明顯的優(yōu)越性,對轉(zhuǎn)基因植物的大規(guī)模篩選與鑒定具有實際意義