同型半胱氨酸誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞炎癥損傷及金雀異黃酮的保護(hù)作用機(jī)制探討.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:探討金雀異黃酮(Genistein,GEN)對同型半胱氨酸(Homocysteine, HCY)誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株ECV-304毒性和炎癥的抑制作用及其分子機(jī)制。
  方法:采用 MTT法檢測細(xì)胞活性,倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化,酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測相關(guān)炎癥因子白細(xì)胞介素6(IL-6)和細(xì)胞間黏附分子1(ICAM-1)水平,流式細(xì)胞術(shù)檢測胞漿活性氧(ROS)水平,western blot和細(xì)胞免疫組化法檢測

2、細(xì)胞核蛋白NF-κB p65表達(dá)情況。
  結(jié)果:①單獨加5.0 mmol/ L的HCY組細(xì)胞活力最差,為(41.27±5.09)%,與對照組(100.00±4.54)%比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。而在用不同濃度的GEN(10、50、100μmol/L)孵育12h后,再加入5.0 mmol/L的HCY,各組細(xì)胞活力均有不同程度的升高。尤其是GEN高劑量組(94.25±2.31)%最明顯,與單獨加HCY組相比差異有統(tǒng)計學(xué)

3、意義(P<0.05),而與對照組相比已沒有明顯差異(P>0.05)。②顯微鏡下見對照組細(xì)胞光滑飽滿,呈單層鵝卵石樣緊密排列,細(xì)胞狀態(tài)良好。而HCY5.0mmol/L組細(xì)胞收縮變圓,間隙變寬,排列雜亂,聚集成團(tuán),脫落細(xì)胞大大增加,狀態(tài)也最差。隨著GEN濃度的增高,細(xì)胞狀態(tài)逐漸好轉(zhuǎn),以100μmol/L的GEN組最好,細(xì)胞飽滿,大小均勻,幾乎無可見脫落現(xiàn)象。③ELISA結(jié)果發(fā)現(xiàn),5.0 mmol/L的HCY作用于細(xì)胞0、6、12、24h后,

4、 IL-6及ICAM-1水平均在不斷增高,且均于12h達(dá)峰值,此后逐漸下降。各組值與0h相比均有顯著差異(P<0.01)。④5.0 mmol/L的HCY作用于細(xì)胞12h時,IL-6及ICAM-1的濃度分別為(2.66±0.28)μg/L、(4.38±0.31)μg/L,對照組兩者表達(dá)量分別為(2.18±0.04)μg/L、(3.24±0.32)μg/L,5.0 mmol/L的HCY組兩個因子水平與對照組相比明顯增高(P<0.05)。然而

5、當(dāng)HCY與不同濃度的GEN聯(lián)合應(yīng)用時,各組 IL-6及 ICAM-1水平均有不同程度的下降,尤其是100μmol/L的GEN組下降最明顯,其值分別為(2.17±0.21)μg/L,(3.38±0.27)μg/L,與單獨加HCY組相比有顯著差異(P<0.01)。⑤5.0 mmol/L的HCY作用于細(xì)胞后,其 ROS水平與對照組相比明顯升高(P<0.01);不同濃度的GEN與5.0 mmol/L的HCY聯(lián)合應(yīng)用,發(fā)現(xiàn)各組ROS水平均有不同程

6、度的降低,其中以GEN高劑量組最顯著(P<0.01)⑥western blot結(jié)果顯示,對照組細(xì)胞核P65蛋白相對表達(dá)量較低,為(6.39±0.85)%,而單獨加5.0 mmol/L的HCY組為(62.24±14.29)%,與對照組相比明顯增高(P<0.01)。不同濃度的GEN聯(lián)合HCY作用于細(xì)胞后,各組P65相對表達(dá)量均有不同程度的下降,以GEN高劑量組(5.61±0.97)%最顯著,與單獨加HCY組相比,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.

7、01)。免疫組織化學(xué)法檢測P65也顯示相似的結(jié)果。
  結(jié)論:①5.0 mmol/ L的HCY可使ECV-304細(xì)胞嚴(yán)重受損,活力下降, IL-6及ICAM-1水平增高,而 GEN能顯著抑制由HCY誘導(dǎo)的細(xì)胞活力下降以及IL-6及ICAM-1表達(dá)的增高,很大程度上改善細(xì)胞狀態(tài)。②5.0 mmol/L的HCY可使胞漿的ROS明顯增高,而GEN可抑制ROS的增高趨勢。③5.0 mmol/L的HCY可使內(nèi)皮細(xì)胞核 NF-κB P65表達(dá)

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