茶樹種子在低溫貯藏過程中差異基因表達的研究.pdf

1、中國是茶樹的起源地,種質(zhì)資源極其豐富,但由于自然和人為的眾多因素,茶樹種質(zhì)資源的流失由來已久。所以為長期保存茶樹的遺傳信息,保護茶樹種質(zhì)資源,尋找可長期保存茶樹種質(zhì)資源的途徑就非常重要。成熟茶樹種子含水率在35～40％左右,一般認為屬頑拗型種子,在保存上存在較大的困難。傳統(tǒng)的貯藏方法是沙藏,即保存在一定濕度、溫度和通氣條件的環(huán)境中,但隨著貯藏時間的延長,發(fā)芽率迅速下降,半年后只有20％左右。 目前種質(zhì)保存的最主要方式是在低溫種質(zhì)

2、庫中保存,但種質(zhì)在低溫庫中的保存也存在種子老化等問題。且茶樹種子不耐低溫,低溫貯藏時種子的活性一般只能維持幾個月的時間,從保存種質(zhì)資源角度來看,遠遠不能達到要求。到目前為止,對頑拗型種子的研究主要集中在貯藏條件與種子發(fā)芽力的關(guān)系以及低溫貯藏過程中生理、生化和細胞學(xué)研究上,在分子水平上對頑拗型種子不耐低溫的本質(zhì)研究得較少。為此本實驗采用cDNA-AFLP技術(shù),以茶樹無性系龍井43種子為實驗材料,進行如下研究： (1)茶樹種子臨界含

3、水量的測定(2)茶樹種子低溫貯藏過程中差異表達基因研究①利用cDNA-AFLP方法,研究同一品種茶樹種子低溫誘導(dǎo)后基因表達差異。 ②對差異條帶克隆測序后,以RT-PCR技術(shù)對差異表達基因進行鑒定。 ③用cDNA末端快速擴增(RACE)技術(shù)克隆對其全長cDNA序列和序列分析。 結(jié)果獲得8條差異片段,通過NCBI進行BLAST比對發(fā)現(xiàn),發(fā)現(xiàn)有6條基因與已知功能基因相關(guān)。這些差異表達的片段序列可分為6類分別是：金屬蛋白