跑臺訓(xùn)練介導(dǎo)bFGF-Caveolin-1-VEGF對大鼠缺血半暗區(qū)神經(jīng)血管再生的調(diào)控.pdf

1、目的:探討跑臺訓(xùn)練介導(dǎo)bFGF/Caveolin-1/VEGF通路促進(jìn)大鼠缺血半暗區(qū)神經(jīng)血管再生的作用機制。
　　方法:選取清潔級SD雄性大鼠162只。隨機分為:假手術(shù)組(Sham-operated，S)、模型組(Model，M)、運動模型組(Exercise Model，EM)、bFGF模型組(bFGF Model， bM)、bFGF運動模型組(bFGF Exercise Model，bEM)，共5組。S組18只;M、bM、EM

2、、bEM又分為7天、28天組，各18只。大鼠局灶性腦缺血再灌損傷模型參照Belayev報道的線栓法復(fù)制，bM、bEM組再灌后立即予側(cè)腦室注射bFGF，灌注后24h測量神經(jīng)行為學(xué)評分，剔除造模不合格大鼠。EM、bEM組再灌注24h后給予跑臺訓(xùn)練。使用2，3，5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色觀察大鼠梗死灶體積。選取腦缺血半暗區(qū)組織，免疫組化觀察CD105、Brdu陽性細(xì)胞數(shù);免疫熒光觀察VEGFR-2/CD34、Brdu/Nestin雙標(biāo)

3、陽性細(xì)胞數(shù);Western-Blot檢測Caveolin-1、VEGF、bFGF的表達(dá)。
　　結(jié)果:1、神經(jīng)行為學(xué)評分:S組Zea Longa5評分均為0分，平衡試驗評分平均分為1.1667±0.51450;各手術(shù)組較S組差異均有意義(P＜0.05); bEM組較同期EM、bM、M組神經(jīng)行為學(xué)評分有降低(P＜0.05); EM、bM較同期M組比較神經(jīng)行為學(xué)評分有降低（P＜0.05）;組內(nèi)28天較7天組神經(jīng)行為學(xué)評分有降低（P＜0.

4、05）;余各組相應(yīng)時間點比較，其差異無意義。2、TTC染色:S組均未見白色梗死灶;各模型組均可見大小不同白色梗死灶，主要集中于大腦中動脈供血部位，如額顳頂葉皮層及尾殼核;bEM組與同期M、EM、bM組比較梗死灶體積有不同程度減小，白色減淡; EM、bM組與同期M組梗死灶較小，組內(nèi)28天較7天組梗死灶有減小。
　　3、大鼠腦組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)變化
　　(1) HE染色:S組未見明顯組織病理學(xué)改變，M組缺血半暗區(qū)可見細(xì)胞腫脹、間隙增大

5、，數(shù)量較少，胞核固縮深染，部分細(xì)胞呈三角形，組織壞死溶解后留下空洞。
　　(2)尼氏染色:S組未見明顯組織病理學(xué)改變，M組缺血半暗區(qū)可見突起明顯，胞體變形，倪氏小體消失、數(shù)目減少，出現(xiàn)空洞。 bEM組較相對應(yīng)時間的M、EM、bM組細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞有減輕，EM、bM較同期M組組織破壞較少，28天組較對應(yīng)7天組組織破壞好轉(zhuǎn)。
　　4、WB檢測
　　(1)大鼠腦缺血半暗區(qū)bFGF蛋白表達(dá):EM組WB圖像灰度比值較M組增高(P＜0

6、.05)。
　　(2)大鼠腦缺血半暗區(qū)VEGF、Caveolin-1蛋白表達(dá):其中bEM7d組Caveolin-1、VEGF的WB圖像灰度比值較EM7d、bM7d、M7d組明顯增高(P＜0.05);EM7d、bM7d較M7d組圖像灰度比值有增高(P＜0.05);EM28d、bEM28d較M28d圖像灰度比值有增高，bEM28d較bM28d圖像灰度比值有增高，差異有意義(P＜0.05)。
　　上述指標(biāo)，組內(nèi)28天組較7天組wB

7、圖像灰度比值降低(P＜0.05);各組較S組圖像灰度比值有增高，差異有意義(P＜0.05)。
　　5、免疫熒光雙標(biāo)
　　(1)VEGFR-2/CD34雙標(biāo):主要表達(dá)在細(xì)胞膜、胞漿上;其中bEM7d組陽性細(xì)胞數(shù)最多，差異有意義(P＜0.05);EM7d、bM7d較M7d組比較陽性細(xì)胞數(shù)有增高(P＜0.05)。
　　(2)Brdu/Nestin雙標(biāo):Brdu主要在細(xì)胞核表達(dá)，Nestin主要在細(xì)胞漿表達(dá);其中bEM7d陽性

8、細(xì)胞數(shù)最多(P＜0.05);EM7d、bM7d較M7d組比較陽性細(xì)胞數(shù)有增高(P＜0.05);EM28d、bEM28d較M28d陽性細(xì)胞數(shù)有增高，bEM28d較M28d陽性細(xì)胞數(shù)有增高，差異有意義(P＜0.05)。
　　上述指標(biāo)組內(nèi)28天組較7天組陽性細(xì)胞數(shù)降低(P＜0.05)，各手術(shù)組比S組陽性細(xì)胞數(shù)有增高，差異有意義(P＜0.05)。
　　6、免疫組化結(jié)果:CD105主要表達(dá)于細(xì)胞膜和胞漿，Brdu主要表達(dá)于細(xì)胞核。bE