Caveolin-1上調(diào)VEGF的表達(dá)對糖尿病大鼠下肢缺血的影響.pdf

1、目的：
　　建立糖尿病大鼠下肢缺血模型，通過鼠尾靜脈注射小凹蛋白-1（Caveolin-1）的重組腺病毒，探討過表達(dá)的Caveolin-1通過上調(diào)VEGF的表達(dá)對糖尿病大鼠下肢缺血的影響及其機(jī)制的研究。
　　方法：
　　雄性SD大鼠80只（200±20g），建立糖尿病大鼠模型。隨機(jī)選取56只糖尿病大鼠分為4組，每組再分為14天和21天組(每小組7只)：正常組（假手術(shù)組）、手術(shù)組、手術(shù)空轉(zhuǎn)染組、手術(shù)轉(zhuǎn)染組，通過手術(shù)結(jié)扎股

2、總動脈并切斷構(gòu)建下肢缺血模型，再運用腺病毒載體轉(zhuǎn)染Caveolin-1基因，于術(shù)后第一天尾靜脈注射腺病毒，術(shù)后14天、21天取大鼠手術(shù)側(cè)下肢腓腸肌標(biāo)本，蘇木精-伊紅（HE）病理染色觀察肌細(xì)胞形態(tài)及炎性細(xì)胞浸潤情況，免疫組化方法檢測 Caveolin-1和血管內(nèi)皮生長因子（ VEGF)的表達(dá)量及血管密度分布情況,分析過表達(dá)Caveolin-1對糖尿病大鼠下肢缺血的影響。
　　結(jié)果：
　　通過各組觀察，手術(shù)轉(zhuǎn)染組大鼠14天手術(shù)側(cè)

3、下肢皮溫比其余組高，傷口結(jié)痂愈合良好，肢體未出現(xiàn)壞死脫落，僅出現(xiàn)肢端發(fā)紺，能正常行走，21天后手術(shù)轉(zhuǎn)染組肢體發(fā)紺好轉(zhuǎn)，活動自如，趾甲正常，大腿內(nèi)側(cè)可捫及動脈搏動。HE染色：14天手術(shù)轉(zhuǎn)染組腓腸肌細(xì)胞排列稍整齊，肌細(xì)胞形態(tài)基本正常，肌纖維間質(zhì)有少量血管形成，有明顯炎癥細(xì)胞浸潤，21天手術(shù)轉(zhuǎn)染組大鼠肌細(xì)胞形態(tài)排列正常，肌纖維間血管分布較多，炎癥細(xì)胞減少。用免疫組化方法檢測Caveolin-1、VEGF表達(dá)：14天轉(zhuǎn)染組大鼠腓腸肌Caveol

4、in-1表達(dá)明顯比手術(shù)組、空轉(zhuǎn)染組、假手術(shù)組高（P<0.05)，21天組比14天轉(zhuǎn)染組表達(dá)高；14、21天轉(zhuǎn)染組糖尿病下肢手術(shù)側(cè)腓腸肌中VEGF表達(dá)明顯比手術(shù)組、空轉(zhuǎn)染組高（P<0.05)。微血管密度（MVD）測定：用免疫組化方法檢測CD-34表達(dá)來反應(yīng)MVD情況，發(fā)現(xiàn)手術(shù)組和空轉(zhuǎn)染組升高不明顯（P<0.01)，但是轉(zhuǎn)染組糖尿病大鼠手術(shù)側(cè)腓腸肌 CD-34表達(dá)明顯比手術(shù)組和空轉(zhuǎn)染組升高（P<0.05)，而且在21天后轉(zhuǎn)染組MVD基本接近