大腸癌血瘀證與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)性及化瘀截毒方抗轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究.pdf

1、血瘀證是包括大腸癌在內(nèi)的各種腫瘤常見的臨床證候，大腸癌轉(zhuǎn)移是大腸癌的基本特性，也是大腸癌患者常見的致死原因?；仡櫸墨I(xiàn)，活血化瘀是中醫(yī)治療腫瘤的重要治則，但在活血化瘀究竟對腫瘤轉(zhuǎn)移有抑制作用還是有促進(jìn)作用問題上，存在著不同看法。對于活血化瘀法能否在惡性腫瘤治療中應(yīng)用，如何應(yīng)用，莫衷一是。那么，究竟血瘀證與大腸癌轉(zhuǎn)移之間相關(guān)性如何，便成為問題的關(guān)鍵，但目前尚缺少這方面的臨床研究，對大腸癌轉(zhuǎn)移機(jī)制以及活血化瘀方藥抗轉(zhuǎn)移機(jī)理也缺乏適宜解釋途徑。

2、為此我們對大腸癌血瘀證與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)性，以及防治大腸癌轉(zhuǎn)移的理論和方法進(jìn)行了深入探討和研究。 1目的理論研究：根據(jù)導(dǎo)師黃乃健教授的學(xué)術(shù)思想，提出并探討大腸癌轉(zhuǎn)移瘀毒傳舍病機(jī)理論及從絡(luò)辨治的防治理論構(gòu)架。 臨床研究：通過對大腸癌術(shù)前患者的臨床證候調(diào)查，探討大腸癌患者臨床證候的分布規(guī)律、血瘀證等中醫(yī)臨床證候與大腸癌轉(zhuǎn)移之間的內(nèi)在聯(lián)系。從臨床證候?qū)W入手，探討大腸癌轉(zhuǎn)移瘀毒傳舍病機(jī)理論的臨床依據(jù)。 實(shí)驗(yàn)研究：通過建立血瘀

3、證及大腸癌肝轉(zhuǎn)移裸鼠動物模型，研究血瘀證影響大腸癌轉(zhuǎn)移的分子生物學(xué)機(jī)制，以及在瘀毒傳舍病機(jī)假說理論基礎(chǔ)上建立的化瘀截毒方抗大腸癌轉(zhuǎn)移的機(jī)制。 2方法2.1理論研究：采用文獻(xiàn)學(xué)、邏輯分析等方法，運(yùn)用中醫(yī)理論，以血瘀證為切入點(diǎn)，探討大腸癌轉(zhuǎn)移“瘀毒傳舍”病機(jī)的理論構(gòu)架，以及化瘀通絡(luò)，截毒防變防治大腸癌轉(zhuǎn)移治則的理論根據(jù)。 2.2臨床研究：臨床研究以術(shù)前大腸癌患者為研究對象，運(yùn)用流行病學(xué)的基本原則和方法(縱向研究和橫斷面調(diào)查)

4、，對大腸癌患者臨床證候與腫瘤生物學(xué)行為之間關(guān)系、血瘀證在諸證候中的分布情況，及與轉(zhuǎn)移間的相關(guān)性進(jìn)行分析，以探討其中的內(nèi)在規(guī)律。2.3實(shí)驗(yàn)研究：以血瘀證裸鼠模型和結(jié)腸腺癌肝轉(zhuǎn)移裸鼠模型為研究對象，探討血瘀證與大腸癌轉(zhuǎn)移的相關(guān)性；以結(jié)腸腺癌肝轉(zhuǎn)移裸鼠模型為研究對象，以化瘀截毒方進(jìn)行干預(yù)，探討化瘀截毒方防治大腸癌轉(zhuǎn)移的機(jī)制。 3結(jié)果3.1理論研究結(jié)果認(rèn)為大腸癌轉(zhuǎn)移的核心病機(jī)是在正虛邪侵的基礎(chǔ)上，瘀毒傳舍，其病變的本質(zhì)是“病絡(luò)”，進(jìn)而首

5、次提出并闡釋大腸癌轉(zhuǎn)移應(yīng)從絡(luò)辨治的初步理論架構(gòu)：包括“氣血不暢，絡(luò)脈失養(yǎng)，毒滯絡(luò)脈”的發(fā)病學(xué)特點(diǎn)、“經(jīng)絡(luò)阻塞，瘀毒互結(jié)，絡(luò)道恣行”的病機(jī)特點(diǎn)、“化瘀通絡(luò)，截毒防變”的防治大腸癌轉(zhuǎn)移的治則特點(diǎn)。 3.2臨床研究結(jié)果3.2.1運(yùn)用因子分析方法得出7個大腸癌的中醫(yī)證候分類：類濕熱蘊(yùn)阻證(包括熱重于濕和濕重于熱)、類大腸瘀滯證、類瘀毒內(nèi)阻證、類脾胃虛弱證氣血雙虧證、類肝腎陰虛證、類氣虛血瘀證、類脾腎陽虛證。本組185例大腸癌患者中以類濕

6、熱蘊(yùn)阻(包括熱重于濕和濕重于熱)、類大腸瘀滯、類瘀毒內(nèi)阻為主，共占69.19％。其次為類脾胃虛弱氣血雙虧證、類肝腎陰虛證、類氣虛血瘀證、類脾腎陽虛證。上述7個中醫(yī)證候中，以血瘀證表現(xiàn)為主要表現(xiàn)的證型包括類大腸瘀滯證、類瘀毒內(nèi)阻證、類氣虛血瘀證3型，占本組病例數(shù)的45.95％。在其他證候中也多有兼夾血瘀表現(xiàn)者。 3.2.2大腸癌病理類型在中醫(yī)證候分布上差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，高分化腺癌以類脾胃虛弱氣血雙虧證、類濕熱蘊(yùn)阻(

7、熱重于濕)證為多；中分化腺癌以類濕熱蘊(yùn)阻(熱重于濕)證、類瘀毒內(nèi)阻證為多；低分化腺癌以類大腸瘀阻證、類瘀毒內(nèi)阻證、類肝腎陰虛證為多。 3.2.3大腸癌病位在中醫(yī)證候分布上差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，盲腸、升結(jié)腸癌以類脾胃虛弱，氣血雙虧證為多；橫結(jié)腸癌以類濕熱蘊(yùn)阻(熱重于濕)證為多；降結(jié)腸癌以類濕熱蘊(yùn)阻(濕重于熱)證為多；乙狀結(jié)腸癌以類濕熱蘊(yùn)阻(濕重于熱)證、類氣虛血瘀證為多；直腸癌以類大腸瘀阻證、類瘀毒內(nèi)阻證、類濕熱蘊(yùn)阻(

8、熱重于濕)證為多。3.2.4大腸癌浸潤深度在中醫(yī)證候分布上差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，侵及肌層以類濕熱蘊(yùn)阻(熱重于濕)證、類濕熱蘊(yùn)阻(濕重于熱)證、類脾胃虛弱，氣血雙虧證為多；侵透全層以類脾胃虛弱氣血雙虧證、類濕熱蘊(yùn)阻(熱重于濕)證、類氣虛血瘀證為多；侵及腸周以類大腸瘀阻證、類瘀毒內(nèi)阻證為多。 3.2.5大腸癌有無轉(zhuǎn)移在中醫(yī)證候分布上差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，有轉(zhuǎn)移者以類大腸瘀阻證、類瘀毒內(nèi)阻證、類肝腎陰虛證為多；

9、無轉(zhuǎn)移以類濕熱蘊(yùn)阻(熱重于濕)證、類脾胃虛弱，氣血雙虧證、類濕熱蘊(yùn)阻(濕重于熱)證為多。經(jīng)Logistic回歸分析，與轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)者為類大腸瘀滯證(P=0.002,OR=3.213)和類瘀毒內(nèi)阻證(P=0.009,OR=3.287)。 3.2.6血瘀證低分化腺癌所占比例明顯高于非血瘀證(P＜0.01)；血瘀證侵及腸周所占比例明顯高于非血瘀證(P＜0.01)；血瘀證淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移比例均顯著高于非血瘀證(P＜0.05)。

10、 3.2.7血瘀證侵犯周徑＞1/2者所占比例明顯高于非血瘀證(P＜0.01)。 3.2.8血瘀證病理分期屬DukesB、C、D期均顯著多于非血瘀證(P＜0.01、P＜0.05)。 3.3實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果3.3.1血瘀證與結(jié)腸腺癌Lovo細(xì)胞肝轉(zhuǎn)移相關(guān)性實(shí)驗(yàn)研究 3.3.1.1血瘀組、瘀加瘤組、腫瘤組的舌質(zhì)顏色積分、耳廓微循環(huán)、血液流變學(xué)檢測的各項(xiàng)指標(biāo)均顯著高于空白組(P＜0.05～P＜0.01)，其中以瘀加瘤組最為

11、顯著。 3.3.1.2瘀加瘤組肝臟表面轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)目明顯高于腫瘤組；肝臟重量，瘀加瘤組最高，其次為腫瘤組，兩者比較有顯著差異(P＜0.05)。 3.3.1.3CD44V6、VEGF蛋白表達(dá)均以瘀加瘤組為最強(qiáng)，與空白組比較有極顯著差異(P＜0.01)，腫瘤組次之，與空白組比較有顯著差異(P＜0.05)；nm23-H1蛋白表達(dá)以空白組的積分光密度為最高，瘀加瘤組積分光密度最低。瘀加瘤組與空白組比較有極顯著差異(P＜0.01)，

12、腫瘤組明顯高于瘀加瘤組，兩者比較有顯著差異(P＜0.05)。 3.3.1.4結(jié)腸腺癌的增殖可使p53mRNA表達(dá)明顯增強(qiáng)；在血瘀狀態(tài)下p53mRNA的表達(dá)也有明顯增強(qiáng)，但相對于大腸腺癌因素對p53mRNA表達(dá)的影響明顯弱，說明血瘀證可改變p53基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)，通過對p53mRNA的影響而起到促進(jìn)轉(zhuǎn)移的作用。 3.3.2化瘀截毒方抗大腸癌轉(zhuǎn)移機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究3.3.2.1中藥組舌質(zhì)顏色積分、耳廓微循環(huán)、血液流變學(xué)檢測的

13、各項(xiàng)指標(biāo)均較腫瘤組顯著改善(P＜0.05～P＜0.01)。 3.3.2.2中藥組肝臟表面轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)目、肝臟重量均明顯少于腫瘤組(P＜0.05)。 3.3.2.3CD44V6、VEGF蛋白表達(dá)中藥組較腫瘤組明顯減弱(P＜0.05)；nm23-H1蛋白表達(dá)中藥組較腫瘤組明顯增強(qiáng)(P＜0.05)。 3.3.2.4p53mRNA表達(dá)強(qiáng)度中藥組較腫瘤組明顯減弱(P＜0.05)。 3.3.2.5高濃度中藥組與空白對照

14、組比較，6小時(shí)侵襲細(xì)胞數(shù)顯著減少(P＜0.01)，不同濃度梯度的中藥組間有量效關(guān)系。 3.3.2.6高濃度及中濃度中藥組120分鐘時(shí)的粘附率顯著低于生理鹽水組(P分別＜0.01，＜0.05)。 3.3.2.7高濃度及中濃度中藥組對裸鼠皮下種植的結(jié)腸腺癌實(shí)體瘤的抑瘤率顯著高于生理鹽水組(P分別＜0.01，＜0.05)。 4結(jié)論4.1血瘀證是大腸癌患者臨床常見的證候。 4.2血瘀證是大腸癌轉(zhuǎn)移的重要促進(jìn)因素。

15、 4.3血瘀證促進(jìn)大腸癌轉(zhuǎn)移的機(jī)制可能與CD44V6、VEGF蛋白表達(dá)增強(qiáng)，及p53mRNA表達(dá)量增多有關(guān)。血瘀證對nm23-H1蛋白表達(dá)無明顯影響。 4.4化瘀截毒方能有效改善大腸癌肝轉(zhuǎn)移動物模型的微循環(huán)狀況，抑制腫瘤轉(zhuǎn)移。 4.5化瘀截毒方抗轉(zhuǎn)移的機(jī)制可能與抑制CD44V6、VEGF蛋白、p53mRNA表達(dá)，及上調(diào)nm23-H1蛋白表達(dá)有關(guān)。 4.6化瘀截毒方能有效減低結(jié)腸腺癌Lovo細(xì)胞侵襲力和與基