HCMV感染對HEL細(xì)胞MCM裝載因子Cdc6與Cdt1的影響.pdf

1、目的 研究人類巨細(xì)胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染對人胚肺成纖維(human embryonic lung fibroblastic,HEL)細(xì)胞的MCM裝載因子Cdc6與Cdt1表達(dá)的影響，從分子水平上探討HCMV的發(fā)病機(jī)制。 方法 用血清饑餓法同步化HEL，細(xì)胞于G<,0>/G<,1>期，流式細(xì)胞術(shù)測細(xì)胞周期；用HCMV感染同步化的HEL細(xì)胞作為感染組，同時(shí)設(shè)模擬感染組為對照

2、組。用倒置相差顯微鏡觀察兩組細(xì)胞形態(tài)改變至感染后7天。于感染后12h(hour)、24h、48h、72h和96h收獲細(xì)胞，提取總的RNA，采用半定量逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)檢測Cdc6 mRNA的表達(dá)水平；用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測兩組細(xì)胞核內(nèi)HCMV Cdt1蛋白。 結(jié)果 1.模擬感染組未見細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，感染組感染后36h HEL細(xì)胞有形態(tài)學(xué)的改變即可見局部HEL細(xì)胞變圓、胞體變大、膨脹，7天時(shí)形態(tài)學(xué)的改變

3、更加明顯，所有細(xì)胞均發(fā)生病變。 2.12h、24h、48h、72h和96h兩組HEL細(xì)胞Cdc6 mRNA表達(dá)水平均有顯著性差異(P<0.05)，12h、24h和48h時(shí)感染組較模擬感染組明顯增加，72h和96h時(shí)模擬感染組較感染組明顯升高。感染組在感染后12h時(shí)Cdc6 mRNA表達(dá)水平最高，后逐漸下降，至72h時(shí)達(dá)最低水平，96h時(shí)又稍有回升；模擬感染組在感染12h時(shí)Cdc6mRNA表達(dá)水平最高，后逐漸下降，至48h時(shí)達(dá)最低

4、水平，72h時(shí)后開始回升，96h時(shí)繼續(xù)回升。 3.12h、24h、和96h兩組HEL細(xì)胞Cdt1蛋白水平均有顯著性差異(P<0.05)，而48h、72h兩組HEL細(xì)胞Cdt1蛋白水平無明顯差異(P>0.05)。12h和96h時(shí)感染組較模擬感染組明顯降低，24h感染組較模擬感染組明顯升高。模擬感染組在感染后12h時(shí)Cdt1蛋白表達(dá)水平最高，后逐漸下降，至24h時(shí)達(dá)最低水平，96h又稍有回升；感染組在感染后12h Cdt1蛋白表達(dá)