HCMV感染對HEL細(xì)胞周期及復(fù)制允許因子Cdt1的影響.pdf

1、目的 研究人巨細(xì)胞病毒(human cytomegalovirus，HCMV)感染對HEL細(xì)胞周期及復(fù)制允許因子Cdtl的影響，探討HCMV感染的發(fā)病機(jī)制。 方法 用HCMV感染同步化的人胚肺成纖維(human embryonic lung fibroblastic，HEL)細(xì)胞作為感染組，同時(shí)設(shè)模擬感染組為對照組。用倒置相差顯微鏡觀察兩組細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化至感染后7天。于感染后12h(hour)、24h、48h、72h和96h

2、收獲細(xì)胞，用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測兩組細(xì)胞核內(nèi)HCMV IE<,1>72蛋白，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期，RT-PCR法檢測Cdt1 mRNA的表達(dá)水平。 結(jié)果 1、模擬感染組未見細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，亦未出現(xiàn)HCMV IE<,1>72蛋白 陽性產(chǎn)物。感染組感染后72h時(shí)即可見局部細(xì)胞變圓，膨脹，胞體及胞核巨大化，7天時(shí)可見所有細(xì)胞均發(fā)生病變；免疫細(xì)胞化學(xué)顯示其 各時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞均在核內(nèi)出現(xiàn)呈棕黃色顆粒的HCMV IE<,1>72蛋

3、白。 2、模擬感染組在感染后12h時(shí)有65.7％的細(xì)胞處于G<,1>期，24h 時(shí)有43.8％的細(xì)胞處于G<,1>期。感染組在感染后12h時(shí)有70.4％的細(xì) 胞處于G<,1>期，24h時(shí)有69.9％的細(xì)胞處于G<,1>期。兩組比較，均有顯 著性差異(P<0.01)，感染組較模擬感染組明顯增多。 3、模擬感染組在感染后12h時(shí)Cdt1 mRNA表達(dá)水平最高,后逐漸下降,至72h時(shí)達(dá)最低水平,96h時(shí)又稍有回升。感染組

4、在感染后12h時(shí)Cdtl mRNA表達(dá)水平較低,24h時(shí)稍有升高,48h達(dá)最高峰,48h后至72h急劇下降,96h時(shí)大致維持72h水平。兩組相比,12h、24h和48h時(shí)Cdtl mRNA表達(dá)水平有顯著性差異(P<0.05),12h和24h時(shí)感染組較模擬感染組明顯降低,48h時(shí)感染組較模擬感染組明顯升高。模擬感染組Cdtl mRNA表達(dá)水平的高峰出現(xiàn)在感染后12h,而感染組的高峰則出現(xiàn)在感染后48h,較之明顯滯后。 結(jié)論