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1、目的：通過(guò)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)與阿霉素(ADR)損傷心肌細(xì)胞共培養(yǎng)體系的建立，模擬MSCs移植的心肌病微環(huán)境，觀察MSCs對(duì)ADR損傷心肌細(xì)胞的凋亡的影響，并探討其作用機(jī)制。 方法：(1)貼壁法分離、培養(yǎng)SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)；酶消化法及差速貼壁法分離、純化、培養(yǎng)SD乳鼠心肌細(xì)胞；原代培養(yǎng)72小時(shí)的心肌細(xì)胞，終濃度為1mg/L的阿霉素(ADR)作用4小時(shí)后建立ADR損傷心肌細(xì)胞模型。(2)原代培養(yǎng)72小時(shí)的
2、心肌細(xì)胞分為三組：正常心肌細(xì)胞對(duì)照組(A組)，ADR損傷心肌細(xì)胞組(B組)，ADR損傷心肌細(xì)胞與MSCs共培養(yǎng)組(C組)。(3)ELISA檢測(cè)各組心肌細(xì)胞條件培養(yǎng)基中胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF-1)和肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)的濃度。(4)Hoechst33258熒光染色、TUNEL法及AnnexinV—FITC流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組心肌細(xì)胞凋亡率。(5)分光光度法檢測(cè)各組心肌細(xì)胞caspase-9和caspase-3活性。(6)Westerb
3、lot檢測(cè)各組心肌細(xì)胞Bax和Bcl-2蛋白表達(dá)水平。 結(jié)果：(1)1mg/L濃度的ADR作用4小時(shí)后，和正常心肌細(xì)胞相比，ADR損傷心肌細(xì)胞存活率下降[(74.77±10.53)％vs100％，P＜0.05]，凋亡率增加[Hoechst33258熒光染色：(9.86±0.75)％vs(6.71±1.18)％，P＜0.051，成功建立心肌細(xì)胞毒性損傷模型。(2)ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示：B組IGF-1濃度高于A組[(507.43±
4、135.98)pg/mlvs(313.53±124.39)pg/ml，P＜0.05]，HGF的濃度亦顯著高于A組[(128.49±17.25)pg/mlvs(56.62±15.01)pg/ml，P＜0.05]；與B組相比，C組IGF-1顯著增高[(1751.37±151.68)pg/mlvs(507.43±135.98)pg/ml，P＜0.05]，HGF的濃度亦顯著增高[(805.72±16.17)pg/mlvs(128.49±17.2
5、5)pg/ml，P＜0.05]。(3)心肌細(xì)胞凋亡檢測(cè)結(jié)果顯示：B組和A組相比，心肌細(xì)胞凋亡率增加[Hoechst33258熒光染色細(xì)胞凋亡指數(shù)(％)：13.92±1.69vs5.92±1.02，P＜0.05；TUNEL細(xì)胞凋亡指數(shù)(％)：16.42±2.01vs6.58±0.80，P＜0.05；AnnexinV—FITC早期凋亡率(％、)：41.79±2.96vs23.94±1.03，P＜0.05；AnnexinV—FITC晚期凋亡率
6、(％)：17.20±1.61vs7.64±0.56，P＜0.05]；C組和B組相比，心肌細(xì)胞凋亡率下降[Hoechst33258熒光染色細(xì)胞凋亡指數(shù)(％)：10.08±1.02vs13.92±1.69，P＜0.05：TUNEL細(xì)胞凋亡指數(shù)(％)：11.25±1.41vs16.42±2.01，P＜0.05；AnnexinV—FITC早期凋亡率(％)：32.99±1.47vs41.79±2.96，P＜0.05；AnnexinV—FITC晚期
7、凋亡率(％)：11.15±1.21vs17.20±1.61，P＜0.05]。(4)B組和A組相比，caspase-9活性顯著增加(0.427±0.018vs0.287+0.012，P＜0.05)，caspase-3活性亦顯著增加(0.356+0.032vs0.231±0.023，P＜0.05)；和B組相比，C組caspase-9活性顯著下降(0.331+0.011vs0.427±0.018，P＜0.05)，caspase-3活性亦顯著下
8、降(0.302±0.020vs0.356±0.032，P＜0.05)。(5)Westernblot檢測(cè)結(jié)果顯示：B組Bax蛋白表達(dá)水平高于A組(0.70±0.03vs0.27±0.02，P＜0.05)，Bcl-2蛋白表達(dá)水平低于A組(0.31±0.02vs0.75±0.01，P＜0.05)；和B組相比，C組Bax蛋白表達(dá)水平下降(0.42±0.02vs0.70±0.03，P＜0.05)，而B(niǎo)cl-2蛋白表達(dá)水平增加(0.48±0.01v
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