電容耦合電刺激對(duì)體外人牙髓細(xì)胞增殖影響的研究.pdf_第1頁(yè)
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1、目的:分離培養(yǎng)人牙髓細(xì)胞,探討其基本的增殖、分化等生物學(xué)特性,通過(guò)利用電容耦合電刺激牙髓細(xì)胞,研究其對(duì)體外培養(yǎng)人牙髓細(xì)胞增殖的影響,以探索利用微電流環(huán)境在牙組織工程中應(yīng)用的前景。 方法:從正畸減數(shù)拔除的年輕恒前磨牙中分離、培養(yǎng)牙髓細(xì)胞,傳代三代至八代的細(xì)胞用于生物學(xué)特性試驗(yàn)研究:1、利用相差顯微鏡觀察系細(xì)胞的一般形態(tài).2、記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線.3、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其表面分子的表達(dá).4、誘導(dǎo)礦化,通過(guò)免疫組化及逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(R

2、eversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR)等鑒定其誘導(dǎo)分化的結(jié)果。在生物學(xué)研究的基礎(chǔ)上,對(duì)體外培養(yǎng)的人牙髓細(xì)胞施加場(chǎng)強(qiáng)30V/cm,頻率分別為5、25、50、75、100KHz的電容耦合電刺激,30min/d,連續(xù)作用4d,觀察不同頻率電容耦合電刺激對(duì)人牙髓細(xì)胞體外增殖作用的影響,對(duì)照組正常狀態(tài)培養(yǎng),從以下方面檢測(cè)電容耦合電刺激對(duì)人牙髓細(xì)胞增殖的影響:1、倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞的

3、形態(tài)改變.2、MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性及增殖情況.3、流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞期。 結(jié)果:本實(shí)驗(yàn)中人牙髓細(xì)胞在體外可多次傳代培養(yǎng)而保持旺盛的生長(zhǎng)狀態(tài),其生長(zhǎng)曲線在8-10天達(dá)到平穩(wěn),流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,GD44、CD90、CD147均為陽(yáng)性,這與間充質(zhì)干細(xì)胞的免疫表型相一致。經(jīng)礦化誘導(dǎo)培養(yǎng)后,免疫組化結(jié)果顯示牙本質(zhì)涎蛋白染色陽(yáng)性,茜素紅染色有礦化結(jié)節(jié)形成以及堿磷酶表達(dá)升高,RT-PCR,DSPP表達(dá)陽(yáng)性。經(jīng)電容耦合電刺激后結(jié)果顯示:1、不

4、同頻率的電刺激作用后細(xì)胞形態(tài)和對(duì)照組無(wú)明顯差別。2、MTT檢測(cè)顯示經(jīng)電容耦合電刺激后的人牙髓細(xì)胞增殖能力和對(duì)照組明顯不同,其中50Hz刺激組生長(zhǎng)曲線最高,明顯快于其他頻率刺激組(P<0.01)。3、流式細(xì)胞儀檢測(cè)表明,經(jīng)電容耦合電刺激作用以后,所有樣本均未發(fā)現(xiàn)有DNA倍體異常的細(xì)胞(diploid:100%);人牙髓細(xì)胞細(xì)胞周期發(fā)生了改變,S期細(xì)胞百分比和刺激頻率有關(guān)。 結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)從人年輕恒牙獲得的人牙髓細(xì)胞易于分離培養(yǎng),細(xì)胞

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