PLIM參與p53功能調(diào)控及其分子機(jī)制研究.pdf

1、第一部分:RLIM參與p53功能調(diào)控及其分子機(jī)制研究
　　 P53通過轉(zhuǎn)錄調(diào)控靶基因表達(dá)，參與細(xì)胞周期阻滯、凋亡、衰老、DNA損傷修復(fù)、細(xì)胞代謝及自噬等重要過程。P53處于細(xì)胞對(duì)應(yīng)激信號(hào)反應(yīng)的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)核心位置，其蛋白水平及功能受到嚴(yán)密的調(diào)控。眾多的P53調(diào)控子中，HDM2處于核心地位。HDM2可促進(jìn)P53泛素化及蛋白酶體降解，還可直接抑制P53轉(zhuǎn)錄活性。調(diào)控HDM2穩(wěn)定性及功能，對(duì)于細(xì)胞啟動(dòng)適合的p53反應(yīng)極為重要。RLIM/R

2、NF12為含有LIM結(jié)構(gòu)域的轉(zhuǎn)錄輔因子，具有E3泛素化連接酶活性。RLIM參與轉(zhuǎn)錄因子及胞內(nèi)蛋白穩(wěn)定性和功能調(diào)控。
　　 本研究旨在探討RLIM參與P53通路的調(diào)控及其分子機(jī)制。通過免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)RLIM在生理水平能夠同P53及HDM2蛋白結(jié)合。體外轉(zhuǎn)染、免疫印跡及定量PCR等實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)過表達(dá)RLIM能夠穩(wěn)定p53蛋白，增強(qiáng)p53轉(zhuǎn)錄活性；而消減RLIM表達(dá)，p53蛋白水平減少，轉(zhuǎn)錄活性降低。RLIM能夠特異性阻斷HDM2對(duì)

3、p53功能的抑制。RLIM能夠阻斷HDM2對(duì)p53的體內(nèi)泛素化及降解。此外，RLIM也能促進(jìn)HDM2體內(nèi)泛素化及蛋白酶體降解，表明RLIM為新的HDM2的E3泛素化連接酶。環(huán)脂突變的RLIM可以激活p53通路及下游靶基因轉(zhuǎn)錄，表明RLIM對(duì)于p53功能的激活作用不依賴于其泛素化功能。采用PI標(biāo)記及流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)RLIM蛋白的微量過表達(dá)可以早期誘導(dǎo)G1期阻滯，后期出現(xiàn)凋亡反應(yīng)。RLIM促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡依賴于細(xì)胞內(nèi)功能