日本血吸蟲中間宿主的遺傳學及免疫學研究.pdf

1、目的:研究日本血吸蟲(Schistosome japonicum)中間宿主湖北釘螺(Oncomelaniahupensis)生物學特性、血淋巴細胞大量獲取的方法學、血淋巴細胞的形態(tài)學、免疫學、遺傳學特性，以進一步揭示日本血吸蟲攻擊并感染釘螺的侵入機制及其自身保護性機制，研究釘螺分類、遺傳特性及篩選抗性株釘螺，為血吸蟲病流行病學調(diào)查研究、血吸蟲病防治策略的制訂提供理論依據(jù)。 方法:參照外周淋巴器官中淋巴細胞的懸浮收集法，獲取釘螺血淋

2、巴細胞，Giemsa染色后觀察其形態(tài)。血淋巴細胞經(jīng)結晶紫染色后分別計數(shù)懸浮法、傳統(tǒng)壓片法及針刺法獲取的血淋巴細胞數(shù)，并對其進行方差分析和Dunnett-t檢驗。取凍融的血淋巴細胞上清進行免疫沉淀、抑菌、吞噬殺菌實驗。十二烷基磺酸鈉.聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分析血淋巴細胞蛋白組份相對分子質(zhì)量(Mr)。凝膠層析純化分離釘螺血淋巴細胞蛋白。RMBI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)釘螺血淋巴細胞。將秋水仙素作用后的釘螺血淋巴細胞進行低滲、固定、

3、氣干法制片和染色，顯微鏡下閱片，進行染色體核型分析。 結果: (1)釘螺血淋巴細胞分為圓形有絲狀偽足、嗜酸性圓形無絲狀偽足、嗜堿性圓形無絲狀偽足和梭形細胞4種形態(tài)，平均直徑依次約為10.93、6.13、6.08及11.06 μm，分別約占細胞總數(shù)的50％、30％、5％及15％。每只釘螺懸浮法、傳統(tǒng)壓片法及針刺法獲取的血淋巴細胞均數(shù)分別為1.50、0.66及0.03×10<'4>/ml。 (2)懸浮法與傳統(tǒng)壓片法、針刺法總

4、體均數(shù)差異有統(tǒng)計學意義(F=281.47，P<0.01)。進一步Dunnett-t檢驗，懸浮法與壓片法、懸浮法與針刺法的總體均數(shù)差異有統(tǒng)計學意義(t<,1>=15.67，t<,2>=24.50，兩組P<0.01)。 (3)凍融的血淋巴細胞上清，與日本血吸蟲蟲卵可溶性抗原(SEA)反應出現(xiàn)絮狀沉淀。 (4)抑菌試驗血淋巴細胞上清對金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌出現(xiàn)明顯的抑菌圈。 (5)血淋巴細胞對白色念珠菌的吞噬率和殺

5、菌率分別為86％、46％。 (6)血淋巴細胞蛋白組份相對分子質(zhì)量約為Mr 112 300、107 100、97 200、73 500、60 000及12 000。 (7)凝膠層析分離純化釘螺血淋巴細胞蛋白得到兩個主峰。 (8)PddBI1640培養(yǎng)釘螺血淋巴細胞因取材污染未能培養(yǎng)成功。 (9)湖北釘螺的染色體數(shù)2n=34，核型公式為14m+8Sm+8St+2t+性染色體。 結論:懸浮法可獲得大量釘

6、螺血淋巴細胞，其具有沉淀SEA、抑制金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌生長及吞噬殺滅白色念珠菌等免疫功能。SDS-PAGE顯示釘螺血淋巴細胞蛋白Mr約為112 300，107 100，972 00，73 500，600 00，12 000。凝膠層析發(fā)現(xiàn)釘螺血淋巴細胞蛋白有兩個主峰。用釘螺血淋巴細胞氣干法制備染色體標本，方法簡便，增加有絲分裂中期核型，圖像清晰，染色體伸展，形態(tài)良好，著絲粒位置明顯，可讀性好，便于進行核型分析。對釘螺血淋巴細胞的研