慢病毒介導(dǎo)TGFβ3和TIMP1體外聯(lián)合感染人髓核細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng).pdf

1、目的：探討慢病毒載體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β3（TGFβ3）、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑1（TIMP1）聯(lián)合感染對(duì)體外培養(yǎng)人退變椎間盤髓核細(xì)胞的影響，從而最終實(shí)現(xiàn)延緩甚至逆轉(zhuǎn)椎間盤退變的目的。
　　方法：?jiǎn)螌优囵B(yǎng)人退變椎間盤髓核細(xì)胞，采用綠色熒光蛋白標(biāo)記慢病毒（GV287-EGFP）評(píng)價(jià)其對(duì)髓核細(xì)胞的感染效率。應(yīng)用構(gòu)建的 TGFβ3-P2A-TIMP1慢病毒載體感染髓核細(xì)胞，在倒置纖維鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，通過(guò) Real-time qPC

2、R技術(shù)檢測(cè)感染后 TGFβ3、TIMP1、Ⅱ型膠原和蛋白多糖的 mRNA表達(dá)量，通過(guò)Western blot技術(shù)檢測(cè)感染后Ⅱ型膠原和蛋白多糖含量，最終評(píng)價(jià)應(yīng)用攜帶TGFβ3-P2A-TIMP1的慢病毒載體體外感染人退變椎間盤髓核細(xì)胞后對(duì)其細(xì)胞外基質(zhì)代謝的影響。
　　結(jié)果：感染復(fù)數(shù)（MOI）為60時(shí)可獲較滿意感染效率。Real-time qPCR示目的基因感染組的 TGFβ3、TIMP1、Ⅱ型膠原、蛋白多糖 mRNA表達(dá)量均明顯高于

3、空病毒感染組及空白對(duì)照組（F＝16.350～74.378，q=2.010～10.620，P<0.05），而空病毒感染組和空白對(duì)照組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。Western blot示目的基因感染組的Ⅱ型膠原、蛋白多糖蛋白表達(dá)量均明顯高于空病毒感染組和空白對(duì)照組（F＝50.495～66.110，q=8.061～16.624，P<0.05），而空病毒感染組和空白對(duì)照組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論：慢病毒載體介導(dǎo)的TGFβ3和TIMP1雙基因聯(lián)合感