退變?nèi)怂韬思毎w外培養(yǎng)及對TGF—β1和IGF-1干預的反應性研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、下腰痛發(fā)病率較高,并造成巨大的社會經(jīng)濟損失,大約有75%到80%的人一生中發(fā)生過下腰痛,椎間盤退變(DDD)是其主要原因。現(xiàn)在的治療方法有保守治療和手術(shù)治療,主要針對的是患者的臨床癥狀,而不是針對疾病的病理過程。隨著分子生物學技術(shù)的發(fā)展,在細胞水平治療DDD有望成為現(xiàn)實。 DDD的病因?qū)W和病理生理學尚不十分清楚。己知正常髓核中富含蛋白多糖和Ⅱ型膠原,纖維環(huán)富含Ⅰ型膠原。早期DDD由髓核中蛋白多糖減少引起。在生物化學水平,蛋白多糖

2、減少反應了髓核細胞合成和分解代謝的失衡,隨著基質(zhì)中蛋白多糖減少,髓核脫水、高度降低使椎間盤承載能力下降,從而影響脊柱的生物力學性能。雖然DDD包含了很多生物化學和生物力學因素,但通過治療來增加蛋白多糖含量,從而增加其含水量及生物力學性能是有潛在治療效果的。1991年Thompson等發(fā)現(xiàn)胰島素樣生長因子(1GF-1)、表皮樣生長因子(EGF)、轉(zhuǎn)化生長因子-p(TGF-p1)能使體外培養(yǎng)的犬椎間盤細胞增加蛋白多糖的合成,并提出用生長因子

3、治療DDD。 實驗目的: (1)經(jīng)皮穿刺抽吸術(shù)誘發(fā)兔椎間盤變性,驗證椎間盤結(jié)構(gòu)缺失導致椎間盤退變的理論。 (2)找出分離退變髓核細胞的簡單易行的辦法 (3)觀察在體外培養(yǎng)條件下,退變髓核細胞的生長情況。 (4)觀察TGF-β1和IGF-1對髓核細胞的生物學活性影響 方法:本實驗首先將兔椎間盤進行穿刺抽吸使其變性,2周后采用胰酶+膠原酶聯(lián)合消化法分離該椎間盤的髓核細胞,分離所獲細胞用DMEM

4、/F12混合培養(yǎng)基進行單層培養(yǎng)。臺盼藍染色測定活力,觀察細胞倍增時間。 人退變髓核細胞分離后同上述培養(yǎng),臺盼藍染色測定活力,觀察其生長狀況,記錄細胞數(shù)目倍增時間,用免疫組化和考馬斯亮藍測定法觀察細胞在生長因子干預下合成Ⅱ型膠原能力的改變。 結(jié)果:兔變性髓核細胞和正常髓核細胞倍增時間相同,髓核細胞體外傳代后活力下降。人髓核細胞臺盼藍染色測定活力在90%~95%,傳代后活力減弱。加入TGF-β1和IGF-1干預,細胞合成Ⅱ型

5、膠原含量增加,聯(lián)合使用效果更加明顯。TGF-β1和IGF-1干預細胞活性具有時間依賴性。 結(jié)論: (1)經(jīng)皮穿刺抽吸術(shù)可以造成兔椎間盤變性,驗證了椎間盤結(jié)構(gòu)缺失導致椎間盤退變的理論 (2)胰酶+膠原酶聯(lián)合消化法,能夠在短時間內(nèi)得到高活率細胞,膠原酶的聯(lián)合使用,可以更好的解釋退變椎間盤組織中膠原成分的改變。 (3)證明一定濃度的TGF-β1和IGF-1在短期內(nèi)能夠部分改善退變的髓核細胞的生物學活性,兩種藥物

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