腺相關(guān)病毒介導(dǎo)的hTGFβ1和hTGFβ3雙基因聯(lián)合體內(nèi)轉(zhuǎn)染逆轉(zhuǎn)兔退變椎間盤(pán)的生物學(xué)效應(yīng).pdf

1、目的：制造兔椎間盤(pán)退變模型；應(yīng)用腺相關(guān)病毒(adeno-associated virus，AAV)介導(dǎo)人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(human transforming growth factor-β1，hTGF-β1)、hTGF-β3基因體內(nèi)轉(zhuǎn)染兔退變椎間盤(pán)，觀(guān)察目的基因的表達(dá)以及單基因轉(zhuǎn)染或雙基因聯(lián)合轉(zhuǎn)染對(duì)退變髓核細(xì)胞的生物學(xué)作用。 方法：成年新西蘭大白兔通過(guò)注射纖維結(jié)合素片段(fibronectin fragment，F(xiàn)n-f)制造

2、椎間盤(pán)退變模型，造模后2、4、8、12周分別進(jìn)行影像學(xué)、形態(tài)學(xué)、組織學(xué)檢測(cè)，觀(guān)察造模椎間盤(pán)變化。將造模成功動(dòng)物隨機(jī)分為4組，各組分別于造模髓核內(nèi)注射rAAV2-hTGFβ1、rAAV2-hTGFβ3、rAAV2-hTGFβ1+rAAV2-hTGFβ3、rAAV2-EGFP(enhanced green fluorescent protein，EGFP)，自身對(duì)照組椎間盤(pán)內(nèi)注射磷酸鹽緩沖液PBS。手術(shù)后4、8、12周時(shí)，收獲各組髓核組織作

3、組織培養(yǎng)或裂解，蛋白多糖的合成由35S硫酸鹽結(jié)合率來(lái)測(cè)定，免疫印跡Western-Blot法檢測(cè)髓核Ⅱ型膠原的含量。分別于術(shù)后1周、12周觀(guān)察hTGF-β1和EGFP的表達(dá)。 結(jié)果：(1)退變椎間盤(pán)內(nèi)注射rAAV2-hTGFβ11周后，髓核中hTGF-β1含量較注射PBS椎間盤(pán)顯著增多；注射rAAV2-EGFP椎間盤(pán)，術(shù)后12周仍可觀(guān)察到EGFP的表達(dá)。(2)基因轉(zhuǎn)染后4周、8周、12周，轉(zhuǎn)染。rAAV2-hTGFβ1組、rAA

4、V2-hTGFβ3組和雙基因聯(lián)合轉(zhuǎn)染組髓核組織Ⅱ型膠原和蛋白多糖的表達(dá)均較自身PBS組增高，各組均有顯著差異。轉(zhuǎn)染rAAV2-EGFP組同自身對(duì)照PBS組比較沒(méi)有顯著差異；(3)造模后4、8、12周，雙基因聯(lián)合轉(zhuǎn)染組椎間盤(pán)Ⅱ型膠原和蛋白多糖的表達(dá)高于單基因轉(zhuǎn)染椎間盤(pán)，有顯著差異。 結(jié)論：rAAV2介導(dǎo)的hTGFβ1和hTGFβ3轉(zhuǎn)染退變的椎間盤(pán)髓核細(xì)胞后，hTGFβ1和hTGFβ3可持續(xù)表達(dá)12周，并可有效的促進(jìn)退變椎間盤(pán)蛋白多