2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、目的:構建人生存素(Survivin)、轉(zhuǎn)化生長因子β3(TGFβ3)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1(TIMP-1)三基因過表達慢病毒載體,通過一次轉(zhuǎn)染,實現(xiàn)Survivin、TGFβ3、TIMP-1三基因在人退變椎間盤髓核細胞的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,通過抑制細胞凋亡、增加細胞外基質(zhì)的合成及抑制其降解,實現(xiàn)逆轉(zhuǎn)或延緩椎間盤退變的目的。
  方法:構建Survivin、TGFβ3、TIMP-1慢病毒載體,聯(lián)合轉(zhuǎn)染人退變髓核細胞,應用Real-Tim

2、e PCR技術檢測轉(zhuǎn)染后三基因的過表達情況,并檢測蛋白多糖和Ⅱ型膠原的mRNA表達量,應用Western blot檢測蛋白多糖和Ⅱ型膠原的蛋白含量,應用caspase-3活性檢測試劑盒檢測caspase-3蛋白活性,應用AnnexinⅤ-PI雙染色法檢測髓核細胞凋亡率。
  結果:人退變髓核細胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染后,Real-Time PCR結果顯示Survivin、TGFβ3、TIMP-1三基因在基因水平均獲得穩(wěn)定過表達,且其表達能維持細

3、胞傳至P3代或更長時間。目的病毒轉(zhuǎn)染組(A組)較空病毒轉(zhuǎn)染組(B組)、空白對照組(C組),蛋白多糖和Ⅱ型膠原mRNA表達量均無明顯差異,Western blot示蛋白多糖和Ⅱ型膠原蛋白含量三組無明顯差異,Caspase-3蛋白吸光度及髓核細胞凋亡率三組亦無明顯差異。
  結論:Survivin、TGFβ3、TIMP-1慢病毒載體能夠穩(wěn)定轉(zhuǎn)染人退變椎間盤髓核細胞,并且能長時間維持其表達,發(fā)揮生物學效應,三基因?qū)υ隗w外培養(yǎng)的髓核細胞的

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