紅細胞補體受體1與系統(tǒng)性紅斑狼瘡活動性的研究.pdf

1、紅細胞的功能就是攜帶氧轉(zhuǎn)運至全身各組織，維持人體正常的生理功能。但近年的研究發(fā)現(xiàn)，紅細胞還具有多重的、強大的免疫功能。早在1930年Duke等<'[1]>在研究錐蟲的血清活性時觀察到在有特異性抗血清和補體存在時錐蟲可粘附到靈長類動物的紅細胞上。1953年Nelson<'[2]>發(fā)現(xiàn)經(jīng)過特異調(diào)理的密螺旋體和肺炎球菌能與人紅細胞發(fā)生粘附反應(yīng)。1979年Fearon<'[3]>分離、純化了這種具有粘附作用的糖蛋白，并發(fā)現(xiàn)這種糖蛋白存在于紅細胞

2、、多形核白細胞、單核細胞、B淋巴細胞、腎上球上皮細胞及淋巴濾泡內(nèi)的樹突狀細胞上，并稱其為紅細胞補體受體1(eryhrocyte complement receptor typel，E-CRI)。 紅細胞補體受體1(E-CRI)具有較多有生理功能：(1)作為C3bBbP轉(zhuǎn)換酶的促衰變因子，抑制經(jīng)典及旁路途徑補體的活化，免受補體對自身的攻擊與破壞。(2)運送經(jīng)補體調(diào)理過的免疫復(fù)合物到肝臟和脾臟，使免疫復(fù)合物在肝臟、脾臟內(nèi)被清除。(3

3、)作為因子H的輔因子幫助因子I裂C3b<'[3]>。作為因子I唯一輔因子使之C3b裂解為C3c及C3dg<'[4-6]>。(4)活化中性粒細胞及單核細胞對C3b介導(dǎo)的免疫復(fù)合物的吞噬，誘導(dǎo)單核細胞分泌白介素1，增強B細胞的分化<'[7]>。 系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是器官非特異性的、全身性的自身免疫性疾病，其發(fā)病機制涉及細胞免疫、體液免疫、補體免疫及眾多的細胞因子。在活動期SLE的血液中?？蓹z測到異常增多的免疫復(fù)合物。如果這些免

4、疫復(fù)合物不能被有效清除，即可沉積在器官和組織內(nèi)，誘發(fā)和加重自身免疫損傷。ANTHONY等<'[8]>及ANGELO等<'[9]>發(fā)現(xiàn)E-CR1與抗磷脂抗體水平成負的線性相關(guān)，與細胞上的C4d/C3d水平及血中CH50水平成正相關(guān)，但是目前尚未見到E-CR1與SLE活動性相關(guān)性的研究報告。 實驗?zāi)康模?本研究采用流式細胞儀檢測技術(shù)，對SLE外周血E-CRl的表達情況進行了測定，并分析其與SLE活動性指數(shù)的相關(guān)性，以期為SL

5、E的發(fā)病機制及SLE活動性監(jiān)測開拓一新的研究領(lǐng)域及方法。 材料與方法： 一、研究對象 選擇2006年10月至2007年2月期間72例我院風(fēng)濕免疫科住院患者，符合1982年美國風(fēng)濕病協(xié)會(ARA)制定的SLE分類標(biāo)準(zhǔn)，全部為女性患者，平均年齡為35.31±11.63歲(16-62歲)，平均病程41.40±44.10月(1個月-192個月)。選擇正常健康人員20例作為對照組，全部為女性，平均年齡為28.7±9.23(

6、21-46歲)。SLE組與對照組性別、年齡構(gòu)成在統(tǒng)計學(xué)上無顯著性差異(P>0.05)。 二、主要試劑及實驗儀器 1．主要試劑生物素標(biāo)記的鼠抗人CD35單克隆抗體(美國Ancell公司生產(chǎn))鏈卵白素藻紅素(steptavidin-phycocerythrin)(美國eBioscien公司生產(chǎn))含1％牛血清磷酸緩沖液。 2．主要實驗儀器流式細胞儀(FACSCOn，美：Becton-Dickinson公司生產(chǎn))低溫離心

7、機(日立公司生產(chǎn))漩渦振蕩器(日立公司生產(chǎn)) 三、實驗方法 1．標(biāo)本采集：清晨抽取受試者空腹肘正中靜脈血3ml，注入含肝素抗凝的一次性離心管中，混勻。 2．試劑準(zhǔn)備： (1)一抗稀釋：原液Monoclonal anti-human CD35/Biotin濃度為1.0mg/ml，按160倍稀釋后濃度為0.0625g/10μl。 (2)二抗稀釋：原液streptavidin-PE(phycoeryth

8、rin)的濃度為250μg/ml，1：25倍稀釋后濃度為0.125μg/ml。 3．紅細胞懸液制備：將3ml抗凝血輕輕搖勻，取10μl血注入流式管中，加入2ml含1％牛血清的磷酸緩沖液(PBS)混勻，以1000 r/min離心4mins。棄上清，再按上述方法稀釋、離心3次備用。 4．加一抗：在離心后的流式管內(nèi)加入1mlPBS，混勻，另取兩個流式管，其中一個管標(biāo)為空白管，另一個管標(biāo)為實驗管(加一抗)，在空白管和試驗管內(nèi)分別

9、加入混勻的紅細胞懸液0.1d。在試驗管內(nèi)加一抗10μl，混勻，室溫避光放置30mins。 5．加二抗：30 mins后將實驗管加入PBS2ml，混勻，以1000r/min離心4mins，共稀釋、離心3次，棄上清備用。在實驗管內(nèi)加入二抗10μl，混勻，室溫避光放置20mins。 6．上機準(zhǔn)備：20mins,后將實驗管加入2mlPBS，混勻，以1000r/min離心4mins，共稀釋、離心3次。將離心后的空白管、實驗管加PB

10、S 0.3-0.5ml混勻，上機。 7．E-CR1測定利用流式細胞儀對樣本進行檢測。PE受激發(fā)后發(fā)出紅色的熒光。以“門技術(shù)”劃定紅細胞，測定每個標(biāo)本門內(nèi)10000個細胞。測定結(jié)果用cell Ques plot軟件(美國BO公司生產(chǎn))進行數(shù)據(jù)分析。分別記錄紅細胞表面CR1的平均熒光強度。 8．在測定E-CR1抽血時，同時抽血測定補體C3、C4及血沉(ESR)。 9．對入組的每位SLE患者做SLE活性指數(shù)(Syste

11、mic LupusErythematosus D isense Activity Index，SLEDAI)<'[10]>，國際狼瘡協(xié)作組/美國風(fēng)濕病學(xué)院系統(tǒng)性紅斑狼瘡損傷指數(shù)(The Systemic Lupus International Collaborating Clinics/American College of Rheumatology Damage Index for Systemic Lupus Erythematos

12、us，SLICC/ACR Damage Index for SLE，SLEDI)<'[11]>和系統(tǒng)性狼瘡活動性測量(Sytemic Lupus Activity Measure，SLAM)測定<'[12]>。四、統(tǒng)計學(xué)方法計量資料以均數(shù)圭標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SPSS 12.0軟件進行分析。組間比較采用t檢驗，P<0.05有顯著性差異，P<0.01有非常顯著差異。相關(guān)性分析P<0.05認為有相關(guān)，P<0.01認為有明顯相關(guān)。 結(jié)論：