體外SELEX法篩選淋病奈瑟菌適體方法的建立.pdf

1、淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhoeae)是我國性傳播疾病中發(fā)病率最高的疾病淋病的致病菌。病變威害人類健康，增加了感染HTV的危險，對我國公共衛(wèi)生已構成十分嚴重的威脅。 SELEX技術即配體指數(shù)富集的系統(tǒng)進化技術(Systematic Evolut ion of Ligands by Exponential Enrichment，SELEX)，是一種新型的體外篩選技術。適體(aptamer)，又稱適配分子或適配子，

2、其實質是運用SELEx技術從人工體外合成的隨機寡核苷酸序列庫中反復篩選得到的能以極高的親和力和特異性與靶分子結合的一段寡核苷酸序列。 適體的功能類似于抗體但明顯優(yōu)于抗體，具有靶分子范圍廣泛、親和力和特異性高、制備方便、穩(wěn)定性好等優(yōu)點，在臨床治療和診斷方法等方面都具有廣闊的應用前景。本研究旨在運用SELEx技術從人工體外合成的隨機ssDNA文庫中篩選到針對淋病奈瑟球菌的特異性適體，為建立快速而簡便檢測淋病奈瑟菌的實驗室方法奠定基礎

3、。 在所進行的研究中，首先在體外合成一個全長78個核苷酸中間含35個隨機序列的隨機核苷酸文庫，取一定量ssDNA于binding buffer中95℃加熱5分鐘，迅速4℃冷卻10分鐘，再投入適量的淋病奈瑟菌，室溫搖勻30分鐘后離心分離，使用洗脫液懸起沖洗，反復4次，盡量洗去結合不強的片段。最后菌體和目的片段的復合體在99℃的蒸餾水加熱3分鐘后中釋放出所篩選的目的片段，使用試劑盒純化這些運用SELEX技術篩選到的寡核苷酸分子，以之