體外SELEX法篩選淋病奈瑟菌適體方法的建立.pdf

1、淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhoeae)是我國(guó)性傳播疾病中發(fā)病率最高的疾病淋病的致病菌。病變威害人類健康，增加了感染HTV的危險(xiǎn)，對(duì)我國(guó)公共衛(wèi)生已構(gòu)成十分嚴(yán)重的威脅。 SELEX技術(shù)即配體指數(shù)富集的系統(tǒng)進(jìn)化技術(shù)(Systematic Evolut ion of Ligands by Exponential Enrichment，SELEX)，是一種新型的體外篩選技術(shù)。適體(aptamer)，又稱適配分子或適配子，

2、其實(shí)質(zhì)是運(yùn)用SELEx技術(shù)從人工體外合成的隨機(jī)寡核苷酸序列庫(kù)中反復(fù)篩選得到的能以極高的親和力和特異性與靶分子結(jié)合的一段寡核苷酸序列。 適體的功能類似于抗體但明顯優(yōu)于抗體，具有靶分子范圍廣泛、親和力和特異性高、制備方便、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，在臨床治療和診斷方法等方面都具有廣闊的應(yīng)用前景。本研究旨在運(yùn)用SELEx技術(shù)從人工體外合成的隨機(jī)ssDNA文庫(kù)中篩選到針對(duì)淋病奈瑟球菌的特異性適體，為建立快速而簡(jiǎn)便檢測(cè)淋病奈瑟菌的實(shí)驗(yàn)室方法奠定基礎(chǔ)

3、。 在所進(jìn)行的研究中，首先在體外合成一個(gè)全長(zhǎng)78個(gè)核苷酸中間含35個(gè)隨機(jī)序列的隨機(jī)核苷酸文庫(kù)，取一定量ssDNA于binding buffer中95℃加熱5分鐘，迅速4℃冷卻10分鐘，再投入適量的淋病奈瑟菌，室溫?fù)u勻30分鐘后離心分離，使用洗脫液懸起沖洗，反復(fù)4次，盡量洗去結(jié)合不強(qiáng)的片段。最后菌體和目的片段的復(fù)合體在99℃的蒸餾水加熱3分鐘后中釋放出所篩選的目的片段，使用試劑盒純化這些運(yùn)用SELEX技術(shù)篩選到的寡核苷酸分子，以之