IL-24泛素化位點(diǎn)突變體抗腫瘤作用的研究.pdf

1、目的:研究比較IL-24泛素化位點(diǎn)突變體和野生型IL-24對(duì)腫瘤細(xì)胞HeLa,HepG2的生長抑制作用并初步探討其機(jī)制，為臨床應(yīng)用IL-24泛素化位點(diǎn)突變體治療惡性腫瘤奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　 方法:培養(yǎng)宮頸癌細(xì)胞株HeLa、肝癌細(xì)胞株HepG2，分別用pcDNA3.1、pcDNA3.1/IL-24和pcDNA3.1/IL-24泛素化位點(diǎn)突變體轉(zhuǎn)染兩種細(xì)胞株，于不同時(shí)間收集細(xì)胞。通過CCK-8檢測(cè)細(xì)胞增殖；FITC-Annexin

2、V染色檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡；DAPI染色檢測(cè)細(xì)胞晚期凋亡；Western blot檢測(cè)Bax， Bcl-2的表達(dá)和Caspas-3的活化情況。
　　 結(jié)果:
　　 1．質(zhì)粒轉(zhuǎn)染48h后，Western blot證實(shí)pcDNA3.1/IL-24泛素化位點(diǎn)突變體和pcDNA3.1/IL-24組中均表達(dá)IL-24蛋白，且pcDNA3.1/IL-24泛素化位點(diǎn)突變體組IL-24的表達(dá)較pcDNA3.1/IL-24組高(P＜0.05)

3、，表明對(duì)IL-24進(jìn)行突變后延緩IL-24蛋白的降解。
　　 2.CCK-8結(jié)果顯示：(1)pcDNA3.1/IL-24泛素化位點(diǎn)突變體和pcDNA3.1/IL-24對(duì)兩種腫瘤細(xì)胞株均有生長抑制作用，且這種抑制作用隨著時(shí)間的延長而增加；(2)pcDNA3.1/IL-24泛素化位點(diǎn)突變體組對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用與pcDNA3.1/IL-24組相比差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，其抑制作用明顯大于pcDNA3.1/IL-24組。

4、r>　　 3.FITC-Annexin V染色結(jié)果顯示在腫瘤細(xì)胞中pcDNA3.1/IL-24泛素化位點(diǎn)突變體組和pcDNA3.1/IL-24組均有早期凋亡細(xì)胞，且pcDNA3.1/IL-24泛素化位點(diǎn)突變體組早期凋亡陽性率高于pcDNA3.1/IL-24組(P＜0.05)。
　　 4.DAPI染色結(jié)果顯示在腫瘤細(xì)胞中pcDNA3.1/IL-24泛素化位點(diǎn)突變體組和pcDNA3.1/IL-24組均有晚期凋亡細(xì)胞，且pcDNA3

5、.1/IL-24泛素化位點(diǎn)突變體組晚期凋亡陽性率高于pCDNA3.1/IL-24組(P＜0.05)。
　　 5．細(xì)胞轉(zhuǎn)染48小時(shí)后，Western blot檢測(cè)空白組，pcDNA3.1組，pcDNA3.1/IL-24組和pcDNA3.1/IL-24泛素化位點(diǎn)突變體組四組中Bax， Bcl-2蛋白表達(dá)。就腫瘤細(xì)胞而言在檢測(cè)的四組中，Bax/Bcl-2的比值pcDNA3.1/IL-24泛素化位點(diǎn)突變體組和pcDNA3.1/IL-24

6、組是增加的，且pcDNA3.1/IL-24泛素化位點(diǎn)突變體組Bax/Bcl-2的比值較pcDNA3.1/IL-24組高。
　　 6．細(xì)胞轉(zhuǎn)染48小時(shí)后，Western blot檢測(cè)空白組，pcDNA3.1組，pcDNA3.1/IL-24組和pcDNA3.1/IL-24泛素化位點(diǎn)突變體組四組中Caspas-3的活化情況。就腫瘤細(xì)胞而言在檢測(cè)的四組中，pcDNA3.1/IL-24泛素化位點(diǎn)突變體組和pcDNA3.1/IL-24組檢測(cè)