人IL-24基因在大腸桿菌中的表達及其抗腫瘤特性的研究.pdf

1、白細胞介素24（IL-24）是近年來發(fā)現(xiàn)的一種腫瘤細胞抑制因子，在腫瘤的基因治療方面具有極大的應用價值。但是到目前為止，還沒有很好的體外大量表達可溶性IL-24蛋白的方法，并且IL-24抑制腫瘤細胞生長的分子機制也沒有研究清楚，這嚴重制約了IL-24在腫瘤臨床治療上的大規(guī)模應用。本論文將從IL-24的原核表達、純化、抗腫瘤特性的鑒定和抗腫瘤機制等方面進行研究。
　　通過PCR擴增人IL-24基因，構建重組質粒PET-ELP-Int

2、ein-IL-24，利用ELP-intein系統(tǒng)成功表達并純化出了可溶性的IL-24蛋白。使用含15mg/L純化的IL-24蛋白的培養(yǎng)基培養(yǎng)肝癌細胞HepG224h后，細胞的凋亡率與對照組相比增加了35％左右，說明原核表達獲得的IL-24蛋白仍然具有抗腫瘤生物學活性。
　　為了研究IL-24抗腫瘤的分子機制，將IL-24及其互作蛋白基因HLA-C和NDUFA13轉染到293T細胞后，通過免疫共沉淀（CO-IP）實驗證明了IL-24

3、與HLA-C、NDUFA13在胞外存在相互作用。通過三種蛋白的定位實驗和熒光能量共振轉移（FRET）實驗證明了IL-24與HLA-C、NDUFA13在細胞內也存在相互作用。互作蛋白的鑒定使我們在IL-24抗腫瘤分子機制的研究上更進了一步。
　　本研究第一次在大腸桿菌中過量表達并進一步純化出可溶并具有生物學活性的IL-24蛋白，為IL-24蛋白的大規(guī)模原核表達提供了一定的理論依據(jù)。IL-24與HLA-C、NDUFA13胞內定位及互作